Мегакариобласты
Мегакариобласты – родоначальные клетки мегакариоцитарного ряда. Размер – около 20 мкм. Ядро круглое, с мелкосетчатой структурой хроматина, иногда сплетенного в виде клубка. Структура ядра грубее, чем у недифференцированного бласта, нередко видны ядрышки. Цитоплазма базофильная, беззернистая, имеет вид узкого ободка. Часто контуры клеток неровные, с отростками цитоплазмы и образованием "голубых" пластинок.
Микрофотографии мегакариобластов:
Промегакариоциты
Промегакариоциты – клетки больших размеров, чем мегакариобласты. Ядро крупнее, чем у мегакариобласта, имеет несколько более грубую структуру и тенденцию к полиморфизму (бухтообразные вдавления, линии шнурования ядра и пр.). Цитоплазма базофильная, беззернистая, в виде узкого ободка, иногда с отростками и образованием "голубых" пластинок.
Микрофотографии промегакариоцитов:
Мегакариоциты базофильные
Мегакариоциты базофильные – клетки больших размеров, чем предыдущие, в два раза больше мегакариобластов. Ядро может быть бухтообразным с нежной структурой базихроматина или более зрелым, многолопастным. Цитоплазма голубого цвета, иногда с азурофильной зернистостью. имеет вид неширокого ободка.
Микрофотографии базофильных мегакариоцитов:
Мегакариоциты полихроматофильные
Мегакариоциты полихроматофильные – гигантские клетки диаметром 40 – 50 мкм. Ядро многолопастное, иногда свернуто в виде клубка или состоит из отдельных шаров. Структура ядра грубая, нередко наблюдается его пикноз. Ядерно-цитоплазматическое соотношение на этой стадии уже изменено в сторону цитоплазмы. Последняя имеет широкую зону, окрашена в светло-голубой цвет, содержит обильную зернистость различных оттенков (красноватая, светло-фиолетовая, фиолетовая). Зернистость в цитоплазме не всегда расположена равномерно. В отдельных участках клетки, ближе к периферии, можно наблюдать скопления мелких зернышек, окруженные ободком гиалиновой голубой цитоплазмы. Иногда цитоплазма вся заполнена такими скоплениями, напоминающими по величине и структуре сформированные кровяные пластинки. Наконец, в клетках можно наблюдать отделение от цитоплазмы готовых пластинок.
Микрофотографии полихроматофильных мегакариоцитов:
Мегакариоциты оксифильные
Мегакариоциты оксифильные – клетки диаметром 60 – 70 мкм. Ядро многолопастное, иногда состоящее из фрагментов. Нередко встречаются многоядерные клетки. Ядро окрашено в темно-фиолетовый цвет, резко пикнотично. Цитоплазма образует большую зону, имеет розовый оттенок и содержит обильную красноватую зернистость. Некоторые клетки занимают почти все поле зрения микроскопа.
Микрофотографии оксифильных мегакариоцитов:
Инволютивные формы мегакариоцитов
Инволютивные формы мегакариоцитов – образуются в результате вызревания мегакариоцитов с постепенным отторжением вещества цитоплазмы и ядра в процессе образования пластинок. Эти формы имеют полисегментированное разреженное ядро и большую зону бледно-розовой цитоплазмы с пылевидной, едва различимой зернистостью.
Фотографии инволютивных форм мегакариоцитов:
Голоядерные клетки
Голоядерные клетки – могут возникать из инволютивных форм мегакариоцитов или в результате бурного распада мегакариоцитов на пластинки. В этом случае свободные ядра имеют остатки цитоплазмы. Встречающиеся в периферической крови при ряде патологий ядра мегакариоцитов обычно называют тромбобластами.
Микрофотографии голоядерных клеток:
Дегенеративные изменения
Дегенеративные изменения могут наблюдаться во всех формах и проявляются в виде резкой сегментации ядра, сморщивания его, вакуолизации цитоплазмы.
Вакуолизация цитоплазмы мегакариоцитов:
Мегакариоцитограмма
Иногда при исследовании костного мозга составляют мегакариоцитограмму. При этом дифференцируют не менее 50 – 100 клеток мегакариоцитарного ростка. Часто приходится сосчитывать их в нескольких мазках пунктата костного мозга. Для более быстрого нахождения клеток мазок просматривают по краям и в конце препарата под малым увеличением. Обнаруженную клетку дифференцируют с иммерсионным объективом. Согласно Г. И. Алексееву, в норме клетки в мегакариоцитограмме представлены следующим образом:
- мегакариобласты и промегакариоциты – 2 – 6%,
- мегакариоциты базофильные – 4 – 8%,
- мегакариоциты полихроматофильные – 42,6 – 65%,
- мегакариоциты оксифильные – 8,3 – 19%,
- инволютивные формы – 3,6 – 9,2%,
- голоядерные клетки – 6 – 13,2%,
- дегенеративные формы – 3,5 – 7,8%.
Сдвиг мегакриоцитограммы влево с увеличением молодых форм может наблюдаться при различных состояниях, характеризующихся пролиферацией мегакариоцитов, в частности при тромбоцитопенической пурпуре (болезнь Верльгофа), постгеморрагической анемии, хроническом миелолейкозе, циррозе печени с гиперспленизмом и др. При этом образование пластинок наблюдается не только у зрелых форм, но и на ранних стадиях мегакариоцитопоэза. Резкая диссоциация в развитии ядра и цитоплазмы мегакариоцитов с плазматизацией цитоплазмы наблюдается при злокачественных новообразованиях, септических состояниях, абсцессе легкого. При этом дегенеративные изменения наблюдаются и в тромбоцитах (старые формы, вакуолизация и пикноз грануломера и др.).
По морфологическим особенностям мегакариоцитов можно косвенно судить и об их функциональном состоянии. При этом мегакариоциты делят на две группы: пластинкосодержащие и пластинкообразующие.
Пластинкосодержащие мегакариоциты
Пластинкосодержащие мегакариоциты содержат в цитоплазме крупную зернистость, по величине и структуре напоминающую кровяные пластинки. Эти клетки можно считать функционально активными, подготовленными для пластинкообразования. У здоровых людей количество пластинкосодержащих форм составляет примерно 41 – 58%.
Пластинкообразующие мегакариоциты
Пластинкообразующие мегакариоциты – клетки, в которых уже произошло отшнуровывание кровяных пластинок ("шнурующие" мегакариоциты). В цитоплазме и вне клетки лежат свободные тромбоциты. У здоровых людей количество пластинкообразующих форм мегакариоцитов составляет 8 – 20%.
Увеличение количества "шнурующих" мегакариоцитов наблюдается при эритремии, геморрагической тромбоцитемии, регенеративной анемии, у больных после спленэктомии и при других заболеваниях, сопровождающихся тромбоцитозом. Уменьшение количества таких мегакариоцитов свидетельствует об угнетении пластинкообразующей функции мегакариоцитов и наблюдается при тромбоцитопенической пурпуре и некоторых симптоматических тромбоцитопениях (цирроз печени, тиреотоксикоз и др.).
Фотографии пластинкообразующих мегакариоцитов:
Тромбоциты
Тромбоциты – лишенные ядра клетки, образовавшиеся из цитоплазмы и оболочек мегакариоцитов. Нормальные зрелые пластинки имеют размеры от 1 до 4 мкм, четкие границы, округлую или овальную форму, сиреневый гиаломер и центрально расположенный грануломер, состоящий из 5 – 20 азурофильных гранул (зерен). Другие виды пластинок: юные (с голубоватым гиаломером и скудной зернистостью), старые (с неровными очертаниями и плотным грануломером, иногда занимающим весь тромбоцит), формы раздражения (мелкие или в виде гигантских хвостатых тромбоцитов и цепочек); в норме составляют лишь небольшой процент и появляются в большом количестве при патологии.
М. И. Кореновская предлагает следующую тромбоцитарную формулу:
- юных – 0 – 0,8%,
- зрелых – 90,3 – 95,1%,
- старых – 2,2 – 5,6%.
- дегенеративных – 0 – 0,2%,
- форм раздражения – 0,8 – 2,3%.
У детей увеличено количество юных форм.
Число юных тромбоцитов возрастает после кровопотери и при ремиссии тромбоцитопенической пурпуры, например, после применения преднизолона, при гемолитическом кризе, после переливаний крови с осложнениями в виде внутритканевого гемолиза, а также при лейкозе.
Патологические формы раздражения в большом количестве появляются после обильных кровотечений.
Увеличение процента старых и дегенеративных форм тромбоцитов наблюдается при наследственных и вторичных тромбопатиях (бензольная интоксикация, цирроз печени, длительное воздействие малых доз ионизирующей радиации и т.п.).
Особенности морфологии и физиологии тромбоцитов были детально описаны Биццоцеро в 1882 г. Тромбоциты или кровяные пластинки, так же как и эритроциты, – уникальный пример «предельной» специализации клетки, функционирующей в отсутствие ядра. Ядерные тромбоциты, так же как и ядерные эритроциты, возникают у рыб и в филогенетическом развитии достигают «безъядерного» состояния у млекопитающих. Имея в своем составе более 10 факторов свертывания крови и адсорбируя на своей поверхности ряд плазменных факторов свертывания, тромбоциты оказываются необходимыми на всех этапах остановки кровотечения. Они принимают участие в реакциях сложного и многоступенчатого процесса свертывания крови, образования пластинчатого тромба и ретракции кровяного сгустка.
Образование тромбоцитов путем отшнуровки от гигантских клеток костного мозга – мегакариоцитов – впервые наблюдал Wright в 1906 г. Позднее Thiery и Bessis сняли микрофильм о мегакариоцитах, переживающих, in vitro, и убедительно показали, что от цитоплазматических отростков этих клеток отпочковываются кровяные пластинки. Эта теория происхождения тромбоцитов подтверждается общностью антигенов, сходством ультраструктуры, биохимических и цитохимических особенностей мегакариоцитов и тромбоцитов.
Тромбоциты, как и все другие клеточные элементы крови, ведут свое начало от стволовой клетки костного мозга. Показано существование унипотентной клетки-предшественницы, лимфоцитоподобной, тромбопоэтинчувствительной. По скорости седиментации эти образующие мегакариоцитарные колонии клетки не больше малого лимфоцита, в костном мозге мыши содержатся в количестве 2-15 на 105, т. е. их примерно в 3 раза меньше, чем других колониеобразующих клеток. Это согласуется с меньшей частотой мегакариоцитов в популяции костномозговых клеток.
Следующей клеточной стадией Ebbe, изучавший кинетику мегакариоцитопоэза у крыс, полагает непосредственного предшественника мегакариоцитов, не определяемого морфологически, способного к синтезу ДНК без митозов, с генерационным временем примерно 16 ч. Нужно как минимум два генерационных цикла, считая за цикл время с начала одного S-периода до начала другого, чтобы клетка стала морфологически дифференцируемой формой мегакариоцита с плоидностью 8n. Внутри популяции мегакариоцитов деления не происходит. Это было доказано Ebbe в опытах с меченым тимидином. Количество меченых мегакариоцитов нарастало до 100%, при этом разведении метки не наблюдалось.
Odell схематически представил нормальный мегакариоцитопоэз из пяти стадий клеточной дифференцировки: коммитированная тромбопоэтинчувствительная клетка, нераспознаваемый морфологически предшественник мегакариоцитов, далее 2 незрелых мегакариоцита и последний – зрелый мегакариоцит.
Среди популяции мегакариоцитов Ebbe выделил 3 группы клеток разной степени зрелости, соотносящиеся между собой как 1:1,34:3,02. Отличие этого деления от ранее принятого в русской школе на мегакариобласты, промегакариоциты и мегакариоциты состоит в том, что клетки плоидностью менее 8п относят не к популяции мегакариоцитов, а к популяции клеток-предшественников II-III класса.
Мегакариобласт – самая незрелая форма, наименьшая по размерам (диаметр – 25-35 мкм) и плоидности, с высоким ядерно-цитоплазматическим отношением, нежной структурой ядра и базофильной цитоплазмой без зернистости. Иногда наблюдаются отростки цитоплазмы, которые дают начало так называемым голубым пластинкам
Промегакариоцит – отличается большими размерами (диаметр 30-50 мкм) и плоидностью, крупным интенсивно окрашенным ядром, иногда зазубренным с тенденцией к полиморфизму. Структура ядра более грубая. В базофильной цитоплазме наблюдается азурофильная зернистость и возможна отшнуровка цитоплазмы.
Мегакариоцит – гигантская клетка костного мозга, диаметр ее достигает 50-80 мкм. Ядро отличается величиной (плоидность 16п и 32п), плотным хроматином и причудливой многодольчатой формой. В цитоплазме мегакариоцита выявляются скопления азурофильной зернистости, чаще наблюдается отшнуровка пластинок. При
замедленной киносъемке мегакариоцитов в культуре было показано, как ядро мегакариоцита становится пикнотичным, цитоплазма выпячивается в виде псевдоподий. Затем мегакариоцит превращается в клетку, состоящую из ядра, окруженного новообразованными пластинками. В дальнейшем эта клетка распадается на отдельные ядерные фрагменты.
Весь процесс превращения мегакариобласта в мегакариоцит, по Ebbe, занимает 43-45 ч. В среднем из 1 мегакариоцита образуется 3000-4000 тромбоцитов.
Таким образом, особенностью кинетики мегакариоцитов является отсутствие деления во всем ряду, и популяция, следовательно, увеличивается только за счет поступления морфологически нераспознаваемых клеток-предшественников костного мозга.
Odell считает, что созревание цитоплазмы возможно только при остановке синтеза ДНК. Причиной окончательного прекращения синтеза ДНК может быть накопление специфического белка – тромбастенина, по аналогии с эритроидным рядом, в котором накопление гемоглобина останавливает репликацию ДНК
Изучение мегакариоцитов костного мозга при помощи трансмиссионного микроскопа показало, что по мере созревания в цитоплазме развивается пластинчатый комплекс, эргастоплазма, образуются внутренняя, средняя и маргинальные зоны в цитоплазме. Более всего дифференцировка заметна по развитию демаркационной мембранной системы и грануляции, которые в большом объеме появляются при плоидизации.
В зрелом мегакариоците на обширной площади цитоплазмы выявляется демаркационная мембранная система, которая образует ограничительные мембраны будущих тромбоцитов. Сходство демаркационных мембран и поверхностных мембран тромбоцитов по характеру реакций на кислые глюкозаминогликаны показано при ультрацитохимическом исследовании. По мере созревания мегакариоцитов : демаркационные мембраны становятся более отчетливыми.
При изучении в сканирующем электронном микроскопе получены снимки мегакариоцитов, отшнуровывающих тромбоциты.
Тромбоциты могут отшнуровываться от мегакариоцитов с различной плоидностью ядра, следовательно, функциональное созревание цитоплазмы не имеет прямой зависимости от уровня плоидности. Однако степень функциональной активности мегакариоцитов зависит от полиморфизма ядра и числа ядерных долей.
Тромбоциты формируются в цитоплазме мегакариоцитов , отшнуровываются в синусы костного мозга, откуда поступают в циркуляцию. В процессе осуществления своих функций тромбоциты гибнут. Срок жизни тромбоцитов наименьший по сравнению с другими клетками крови .
Н. А. Торубарова и Е. Н. Мосягина подробно разбирают вопросы, почему метод аутотрансфузии меченных in vitro тромбоцитов достаточен при определении максимальной продолжительности жизни пластинок и оказывается неудачным при определении средней продолжительности их жизни. Дело отчасти в том, что радиоактивность в периферической крови выявляется не сразу после аутотрансфузии и нарастает в течение 20-30 ч, возможно вследствие прилипания введенных тромбоцитов к эндотелию сосудов, и достигает не более 50-60% ожидаемого уровня скорее всего из-за случайного разрушения, тромбоцитов к этому моменту. Средняя, продолжительность жизни тромбоцитов, определенная этим методом, оказывается равной 4-6 дням. Максимальная длительность жизни тромбоцитов определяется как интервал времени от момента переливания до полного исчезновения метки и составляет 8-11 суток.
Е. Н. Мосягина считает, что более реальна средняя продолжительность жизни тромбоцитов, определенная по активности кислой фосфатазы. Активность фермента высока в новообразованных тромбоцитах, поступающих из костного мозга в периферическую кровь, и быстро исчезает с возрастом пластинок. Средняя продолжительность жизни тромбоцитов, определенная при подсчете доли фосфатазоположительных тромбоцитов до и после часовой инкубации in vitro, составила 2-3 суток.
Около 35-40% циркулирующих тромбоцитов ежедневно разрушается . При этом ежесуточное разрушение вследствие старения составляет только 5% (88). Около 30% тромбоцитов гибнет случайно в непрерывно протекающем в организме процессе свертывания. Последнее подтверждается увеличением средней длительности жизни тромбоцитов при введении антикоагулянтов.
Предполагается существование нескольких механизмов регуляции тромбоцитопоэза. Скорость образования тромбоцитов, по-видимому, регулируется путем обратной связи с пулом предшественников. Пример этому: искусственное повышение числа тромбоцитов в периферической крови после переливания свежих тромбоцитов угнетает тромбоцитопоэз, а кровопускание стимулирует вызревание тромбоцитов. При искусственном уменьшении числа тромбоцитов увеличиваются размеры, плоидность, число и степень созревания и соответственно продуктивность мегакариоцитов. Если в норме цитоплазмо-ядерное отношение в мегакариоците равно в среднем 3,8, то при стимуляции продукции (искусственная тромбоцитопения) оно становится значительно выше – равным 8,4.
Присутствие гуморальных стимуляторов, тромбопоэтинов, доказано в различных экспериментах и при изучении тромбоцитопенических состояний. Тромбопоэтины обнаружены в крови после спленэктомии, при асептическом воспалении, у больных эритремией, эритромиелозом, острой тромбоцитопенической пурпурой, сифилисом.
Возможно существование нескольких стимуляторов, действующих на разных этапах тромбоцитопоэза. Например, одного, активирующего созревание мегакариобластов, и другого, усиливающего процесс отшнуровки тромбоцитов.
Установлено также существование гуморального антитромбопоэтина – ингибитора тромбоцитопоэза. Как стимуляторы, так и ингибиторы пока не выделены в чистом виде, не известны их химическая природа, механизм действия и место выработки в организме.
Тромбоциты, или кровяные пластинки, образуются из гигантских клеток красного костного мозга — мегакариоцитов. В костном мозге мегакариоциты плотно прижаты к промежуткам между фибробластами и эндотелиальными клетками, через которые их цитоплазма выдается наружу и служит материалом для образования тромбоцитов. В кровотоке тромбоциты имеют круглую или слегка овальную форму, диаметр их не превышает 2—3 мкм. У тромбоцита нет ядра, но имеется большое количество гранул (до 200) различного строения. При соприкосновении с поверхностью, отличающейся по своим свойствам от эндотелия, тромбоцит активируется, распластывается и у него появляется до 10 зазубрин и отростков, которые могут в 5—10 раз превышать диаметр тромбоцита. Наличие этих отростков важно для остановки кровотечения.
В норме число тромбоцитов у здорового человека составляет 2—4-1011 /л, или 200—400 тыс. в 1 мкл. Увеличение числа тромбоцитов носит наименование «тромбоцитоз», уменьшение — «тромбоцитопения». В естественных условиях число тромбоцитов подвержено значительным колебаниям (количество их возрастает при болевом раздражении, физической нагрузке, стрессе), но редко выходит за пределы нормы. Как правило, тромбоцитопения является признаком патологии и наблюдается при лучевой болезни, врожденных и приобретенных заболеваниях системы крови.
Основное назначение тромбоцитов — участие в процессе гемостаза (см. раздел 6.4). Важная роль в этой реакции принадлежит так называемым тромбоцитарным факторам, которые сосредоточены главным образом в гранулах и мембране тромбоцитов. Часть из них обозначают буквой Р (от слова platelet — пластинка) и арабской цифрой (Р1, Р2 и т. д.). Наиболее важными являются Р3, или частичный (неполный) тромбопластин, представляющий осколок клеточной мембраны; Р4, или антигепариновый фактор; Р5, или фибриноген тромбоцитов; АДФ; контрактильный белок тромбастенин (напоминающий актомиозин), вазоконстрикторные факторы — серотонин, адреналин, норадреналин и др. Значительная роль в гемостазе отводится тромбоксану А2 (ТхА2), который синтезируется из арахидоновой кислоты, входящей в состав клеточных мембран (в том числе и тромбоцитов) под влиянием фермента тромбоксансинтетазы.
На поверхности тромбоцитов находятся гликопротеиновые образования, выполняющие функции рецепторов. Часть из них «замаскирована» и экспрессируется после активации тромбоцита стимулирующими агентами — АДФ, адреналином, коллагеном, микрофибриллами и др.
Тромбоциты принимают участие в защите организма от чужеродных агентов. Они обладают фагоцитарной активностью, содержат IgG, являются источником лизоцима и β-лизинов, способных разрушать мембрану некоторых бактерий. Кроме того, в их составе обнаружены пептидные факторы, вызывающие превращение «нулевых» лимфоцитов (0-лимфоциты) в Т- и В-лимфоциты. Эти соединения в процессе активации тромбоцитов выделяются в кровь и при травме сосудов защищают организм от попадания болезнетворных микроорганизмов.
Регуляторами тромбоцитопоэза являются тромбоцитопоэтины кратковременного и длительного действия. Они образуются в костном мозге, селезенке, печени, а также входят в состав мегакариоцитов и тромбоцитов. Тромбоцитопоэтины кратковременного действия усиливают отшнуровку кровяных пластинок от мегакариоцитов и ускоряют их поступление в кровь; тромбоцитопоэтины длительного действия способствуют переходу предшественников гигантских клеток костного мозга в зрелые мегакариоциты. На активность тромбоцитопоэтинов непосредственное влияние оказывают ИЛ-6 и ИЛ-11.
P.S. Только вот я сама из города и у нас его в продаже не нашла, заказывала через интернет.
P.S. Я тоже из города ))