Забор крови на ретикулоциты

Описание

Ретикулоциты – это молодые красные кровяные клетки, переходная стадия от стволовой клетки к зрелому эритроциту.

Жизненный цикл эритроцита начинается в костном мозге, где некоторые стволовые клетки определяются со своей специализацией и идут по этому пути развития. Из костного мозга подавляющее число эритроцитов выходит полностью созревшими, но 2% из них покидают костный мозг в незрелом состоянии – это и есть ретикулоциты. Для дозревания им нужно 2 дня .

Отличить зрелые эритроциты от ретикулоцитов можно, если клетки крови окрасить и внимательно рассмотреть под микроскопом. В ретикулоцитах видны гранулы и нити, а в эритроцитах их нет. Ретикулоциты можно найти в крови и материале, полученном из костного мозга. Количество их меняется в разных ситуациях.

«Дирижирует» процессом эритропоэза или синтеза красных кровяных телец гормон эритропоэтин, место выработки которого – почки. Сигналом для начала синтеза гормона служит снижение концентрации кислорода в крови. Поскольку кислород переносится эритроцитами, это значит, что их не хватает. Выработанный почками эритропоэтин поступает с током крови в костный мозг и стартует синтез эритроцитов. Когда произведено достаточное количество клеток и кровь насытилась кислородом, выработка эритропоэтина тормозится, а следом перестают производиться эритроциты.

У новорожденных, у которых обменные процессы намного быстрее, чем у взрослых, уровень этих клеток повышен. Много их бывает в крови в тех случаях, когда эритроцитов требуется слишком много, и они не успевают созреть. Тогда в ней могут обнаруживаться еще и нормобласты – предшественники ретикулоцитов. Это может быть при массивном разрушении эритроцитов (кровотечение, гемолиз), а также при болезнях костного мозга.

Повреждение костного мозга приводит к тому, что основных клеток крови, переносящих кислород, вырабатывается слишком мало. Это создает гипоксию всех органов.

Чтобы узнать, насколько тяжела анемия, определяют такой показатель, как ретикулоцитарный индекс. Формула такая: процент молодых клеток умножают на гематокрит (45), полученное число делят на количество суток, за которые ретикулоциты поступают в кровь (1,85). Показатель отражает работу костного мозга за последние 2-е суток.

Ретикулярный индекс меньше 2 означает, что в костном мозге продукция эритроцитов угнетена и их не хватает.

Если показатель больше 2 или даже 3, то это говорит о том, что эритроцитов произведено слишком много. Это бывает при избыточной активности костного мозга, полицитемии или опухолевом процессе, развивающемся в системе крови, курении, чрезмерной продукции эритропоэтина.

Ретикулоцит – это молодая форма эритроцитов, их предшественник. У здорового человека в крови содержится от 0,2 до 1,2 % этих клеток. Это содержание ретикулоцитов относительно эритроцитов. Время созревания их составляет от 4 до 5 дней.

Ретикулоцит – это что?

Характерной особенностью молодых форм эритроцитов является присутствие в цитоплазме зернисто-нитчатой субстанции, которая представляет собой агрегированные митохондрии и рибосомы. Эта субстанция выявляется с помощью особого метода окраски мазков крови. Такая окраска ретикулоцитов называется суправитальной, т.е. производится минуя предварительную фиксацию клеток.

Группы ретикулоцитов

Существует пять групп ретикулоцитов. Они отличаются по ретикулярной сеточке. Чем сеточка гуще, тем ретикулоцит моложе.

Самый молодой ретикулоцит – это клетка, имеющая сеточку в форме густого клубка. Такие клетки относятся к ретикулоцитам 1-й группы. Более зрелые ретикулоциты проявляются как субстанция в виде четко различимой сеточки. А у 4-5 групп она выглядит в виде отдельных нитей и зерен. Обычно у людей здоровых в крови преобладают 4 и 5 группа ретикулоцитов, т.е. более зрелые. Они составляют до 80 % всех ретикулоцитов. Но при отдельных патологиях, когда регенерация усилена, происходит увеличение 1-3 групп ретикулоцитов, т.е. молодых форм. Это наблюдается при следующих патологиях:

• В случае ретикулоцитарного криза при В12-дефицитных анемиях.
• Гемолитической анемии и др.
• Эритролейкозах.

Функции ретикулоцитов

Ретикулоциты выполняют функцию аналогичную эритроцитам, т.к. переносят кислород к различным тканям и органам, но эффективность этого процесса у них несколько ниже, чем у зрелых эритроцитов. Ретикулоциты способны адсорбировать молекулы железа, содержащегося в гемоглобине за счет рецепторов к трансферрину.

Как производят забор крови на ретикулоциты?

Допустим, вы сдали анализ крови. Ретикулоциты – что это? При любом ли анализе они выявляются? Забор крови на этот показатель производится во время общего анализа. Если это необходимо, врач, назначивший анализ, укажет в направлении, что нужно дополнительно сделать подсчет ретикулоцитов.

Особой подготовки этот анализ не требует, но все же принято сдавать его утром натощак. Этот анализ можно сделать в любое время суток, если это необходимо. Кровь берется из пальца, ее исследование проводят в гематологическом отделе лаборатории.

Подсчет ретикулоцитов производят в суправитально окрашенном мазке микроскопическим методом, т.е. путем подсчета их количества под микроскопом. В современных лабораториях на сегодняшний день существуют аппаратные методы подсчета ретикулоцитов.

Как сдать кровь на ретикулоциты? Что это такое и где такой анализ выполнить? На эти вопросы ответы получены. Теперь поговорим о нормальных значениях этого показателя.

Ретикулоциты. Обозначение в анализах

Какова же норма эритроцитов в периферической крови? Половые различия нормы имеют значение только после 11-12 лет при подсчете такого показателя, как ретикулоциты в крови. Норма у детей до этого возраста одинакова. После того как у девочек начинаются регулярные менструации, ежемесячная потеря крови приводит к расширению диапазона колебаний клеток эритроидного ряда.

Ознакомится с нормой ретикулоцитов в периферической крови можно в таблице, приведенной ниже.

Возраст	Норма ретикулоцитов в %
Новорожденные	0,15-1,5
2 недели	0,45-2,0
1-2 месяца	0,25-0,95
6 месяцев	0,2-1,0
2-6 лет	0,25-0,75
6-12 лет	0,25-1,3
Мужчины после 12 лет	0,25-1,7
Женщины после 12 лет	0,12-2,1

О чем свидетельствует увеличение ретикулоцитов?

Особенно важное значение имеет определение количества ретикулоцитов при анемиях. Состояние, при котором ретикулоциты повышены, называется ретикулоцитозом. Увеличение этих клеток, сопровождающееся нарастанием уровня гемоглобина, свидетельствует о хорошей регенераторной способности костного мозга. В частности, ретикулоциты повышены бывают при следующих патологиях:

• Гемолитические анемии (заболевания, при которых происходит разрушение эритроцитов – гемолиз) – ретикулоциты могут быть выше 60 %. Особенно данный показатель возрастает при гемолитических кризах.
• Воздействие на организм гемотоксинов, при которых происходит гемолиз. Это может быть яд гадюки или лекарственные препараты, применяемые для лечения эритремии. Токсины при малярии также вызывают гемолиз.

Различают ретикулоцитоз истинный и ложный.

Истинный и ложный ретикулоцитоз

При истинном ретикулоцитозе повышение молодых эритроцитов в крови сопровождается повышенным их количеством в костном мозге. Это свидетельствует о процессе эритропоэза, т.е. об истинном образовании эритроцитов.

При ложном ретикулоцитозе ретикулоциты повышаются только в периферической крови, а в костном мозге их количество снижено или остается в норме. Это может свидетельствовать о вымывании их в кровоток из костного мозга. Подобный процесс наблюдается при воспалительных или опухолевых процессах в костном мозге, например, при метастазах.

О чем свидетельствует снижение ретикулоцитов?

Количество ретикулоцитов снижается при угнетении эритропоэза. Это может происходить при таких патологиях, как:

• Апластические анемии (угрожающие жизни больного состояния).
• В12-дефицитная анемия.
• Железодефицитные анемии.
• Фолиеводефицитные анемии.
• Седиробластная анемия.
• Талассемия.
• Опухолевые процессыв костном мозге.
• Нарушения работы щитовидной железы (снижении функции), например, при микседеме.
• Тяжелые болезни почек, последствием которых может быть снижение эритропоэза.
• Тяжелый алкоголизм, который приводит к серьезным нарушениям работы печени и почек.
• Хронические инфекции.
• При уремии – состоянии при почечной недостаточности, которое становится причиной повышенного содержания в крови азотистых веществ.
• После приема некоторых лекарственных средств, таких как "Карбамазепин" или "Хлорамфеникол", а также при длительном приеме сульфаниламидов.

Мы выяснили что собой представляет такая клетка крови, как ретикулоцит. Это молодые эритроциты, из которых в дальнейшем развивается полноценная красная кровяная клетка, снабжающая все ткани и органы нашего организма кислородом.

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

1. Предметные стекла.
2. Шлифованные предметные стекла.
3. Влажная камера.
4. Смесители для белых и красных кровяных телец.
5. Стекла с луночкой.
6. Микроскоп.
7. Бриллианткрезиловая синька.
8. Абсолютный этиловый спирт.
9. Метиловый спирт или смесь Никифорова (равные части этилового 96° спирта и эфира).
10. Реактив Гайема или 3% раствор поваренной соли.
11. Иммерсионное масло.
12. Набор инструментов для укола в палец.

В зависимости от строения зернисто-сетчатой субстанции различают пять видов ретикулоцитов: пылевидный, венчикообразный, неполносетчатый, полносетчатый и клубкообразный (см. рис).

Различные группы ретикулоцитов по степени зрелости

Взятие крови с целью подсчета в ней ретикулоцитов производят по указанию врача. Чтобы подсчитать количество ретикулоцитов, их окрашивают. С этой целью используют:

1. Способ прижизненной (суправитальной) окраски ретикулоцитов.
2. Способ одновременной суправитальной окраски тромбоцитов и ретикулоцитов по Алексееву.

Рассмотрим данные способы более подробно.

Прижизненная (суправитальная) окраска ретикулоцитов

Для этого способа необходимы следующие реактивы:

1. Абсолютный этиловый спирт: в сухую с притертой пробкой посуду помещают прокаленную безводную (белого цвета) сернокислую медь и приливают 1/4 часть абсолютного спирта. Содержимое взбалтывают. Абсолютный спирт (спирт, не содержащий воды) можно получить обезвоживая спирт сернокислой медью, предварительно прокаленной. Обезвоживание прекращают тогда, когда сернокислая медь перестает голубеть.
2. Насыщенный раствор бриллианткрезиловой синьки в абсолютном спирте: к 80 мл абсолютного спирта прибавляют 1 г бриллианткрезиловой синьки.
3. Азур I.

Техника прижизненной окраски и подсчета ретикулоцитов

Предметные стекла заранее покрывают насыщенным раствором бриллианткрезиловой синьки. Свежевыступившую каплю крови распределяют по предметному стеклу с краской, как при приготовлении мазка крови. Препарат немедленно помещают на 6-8 минут во влажную камеру, после чего высушивают на воздухе и микроскопируют (окуляр 7Х, объектив 90X с поднятым конденсором). Ретикулоциты подсчитывают точно так же, как тромбоциты, с ограничителем поля зрения. Ретикулоциты, окрашенные бриллианткрезиловой синькой, бледно-зеленые с сеточкой голубого или синего цвета (см. рис.).

Ретикулоциты, окрашенные бриллианткрезиловой синькой

Вместо бриллианткрезиловой синьки для окраски ре тикулоцитов можно использовать, согласно прописи Магиной, краску азур I (1 г азура I на 40 мл абсолютного спирта; выдерживают при комнатной температуре 2 дня).

Одновременная суправитальная окраска тромбоцитов и ретикулоцитов по Алексееву

Для этого способа применяют краску Алексеева. В колбу емкостью 100 мл насыпают 1 г краски азур II и добавляют приготовленный в отдельной колбе реактив следующего состава: 5 г лимоннокислого натрия, 4 г хлористого натрия и 45 мл дистиллированной воды. Содержимое колбы медленно нагревают на асбестовой сетке при постоянном помешивании, не доводя до кипения. Охлаждают, фильтруют. Фильтрат используют в качестве рабочего раствора краски.

Техника одновременной окраски и подсчета тромбоцитов и ретикулоцитов

В смеситель для лейкоцитов до метки 1,0 набирают краску Алексеева, вытирают кончик от краски и кладут на стол. Производят более глубокий, чем обычно, укол в палец. Кровь набирают до 4/5 объема расширенной части смесителя, следя за тем, чтобы в нее не попадали пузырьки воздуха. Кровь быстро выдувают из капиллярной части смесителя на ватку, а остальное содержимое — в луночку предметного стекла. С луночки жидкость вновь набирают в смеситель. Двух-, троекратным повторением этой манипуляции смешивают кровь с реактивом. Набрав последний раз жидкость в смеситель, его оставляют в горизонтальном положении на 15-30 минут для окрашивания ретикулоцитов и тромбоцитов. Затем смеситель встряхивают в течение минуты и выпускают 1-2 капли. Из последующих капель готовят тонкие мазки. Препараты высушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом и докрашивают краской Романовского в разведении 1-2 капли на 1 мл воды в течение 35-45 минут. Краску смывают водой, а мазки высушивают и микроскопируют. В мазке, окрашенном по Алексееву, ретикулоциты розовые с сеточкой синего цвета (см. рис.), а тромбоциты голубовато-сиреневого цвета.

Ретикулоциты, окрашенные по Алексееву

Подсчет ретикулоцитов и тромбоцитов производят одновременно на 1000 эритроцитов так же, как описано в теме «Тромбоциты». Результаты для ретикулоцитов выражают в promille; тромбоциты рассчитывают на 1 мм3 крови (для расчета учитывают количество эритроцитов, подсчитанных у данного больного).

В крови здоровых лиц насчитывают 5-10 % ретикулоцитов.