Проба на скрытый гемолиз

4. Пробы на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента

4.1. Двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином

4.2. Проба на совместимость на плоскости при комнатной температуре

4.3. Непрямая проба Кумбса

4.4. Проба на совместимость с применением 10% желатина

4.5. Проба на совместимость с применением 33% полиглюкина

Проба на индивидуальную совместимость позволяет убедиться в том, что у реципиента нет антител, направленных против эритроцитов донора и таким образом предотвратить трансфузию эритроцитов, несовместимых с кровью больного.

Проба на совместимость, выполняемая на плоскости при комнатной температуре, имеет целью выявить у реципиента полные групповые агглютинины системы АВ0, MNSs, Lewis и др. Проба на совместимость с применением 10% желатина, 33% полиглюкина, непрямая проба Кумбса предназначена для выявления у реципиента неполных групповых антител. Двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином предусматривает выявление и тех и других антител, в том числе групповых гемолизинов.

Наиболее чувствительной и рекомендуемой является двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином, затем комбинация двух проб – пробы на плоскости при комнатной температуре и непрямой пробы Кумбса. Вместо непрямой пробы Кумбса может быть применена реакция конглютинации с 10% желатином или реакция конглютинации с 33% полиглюкином. Последняя проба уступает по чувствительности первым двум, однако занимает меньше времени.

4.1. Двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином

Первый этап. В маркированную пробирку вносят 2 объема (200 мкл) сыворотки реципиента и 1 объем (100 мкл) 2% взвеси трижды отмытых эритроцитов донора, суспендированных в физиологической растворе или LISS (раствор низкой ионной силы). Содержимое пробирки перемешивают и центрифугируют при 2500 об/мин (около 600g) в течение 30 с. Затем оценивают наличие гемолиза в надосадочной жидкости, после чего осадок эритроцитов ресуспендируют, слегка постукивая кончиком пальца по дну пробирки, и определяют наличие агглютинации эритроцитов. При отсутствии выраженного гемолиза и/или агглютинации переходят к выполнению второго этапа пробы с использованием антиглобулиновой сыворотки.

Второй этап. Пробирку помещают в термостат при температуре 37°С на 30 мин, после чего снова оценивают наличие гемолиза и/или агглютинации эритроцитов. Затем эритроциты трижды отмывают физиологическим раствором, добавляют 2 объема (200 мкл) антиглобулиновой сыворотки для пробы Кумбса и перемешивают. Пробирки центрифугируют в течение 30 с, осадок эритроцитов ресуспензируют и оценивают наличие агглютинации.

Учет результатов проводят невооруженным глазом или через лупу. Выраженный гемолиз и/или агглютинация эритроцитов указывает на присутствие в сыворотке реципиента групповых гемолизинов и/или агглютининов, направленных против эритроцитов донора, и свидетельствует о несовместимости крови реципиента и донора. Отсутствие гемолиза и/или агглютинации эритроцитов свидетельствует о совместимости крови реципиента и донора.

4.2. Проба на совместимость на плоскости при комнатной температуре

На пластинку наносят 2 – 3 капли сыворотки реципиента и добавляют небольшое количество эритроцитов с таким расчетом, чтобы соотношение эритроцитов и сыворотки было 1:10 (для удобства рекомендуется сначала выпустить через иглу несколько капель эритроцитов из контейнера на край пластинки, затем оттуда стеклянной палочкой перенести маленькую каплю эритроцитов в сыворотку). Далее эритроциты перемешивают с сывороткой, пластинку слегка покачивают в течение 5 мин, наблюдая за ходом реакции. По истечении указанного времени в реагирующую смесь можно добавить 1 – 2 капли физиологического раствора для снятия возможной неспецифической агрегации эритроцитов.

Учет результатов. Наличие агглютинации эритроцитов означает, что кровь донора несовместима с кровью реципиента и не должна быть ему перелита. Если по истечении 5 мин агглютинация эритроцитов отсутствует, то это означает, что кровь донора совместима с кровью реципиента по групповым агглютиногенам.

4.3. Непрямая проба Кумбса

В пробирку вносят одну каплю (0,02 мл) осадка трижды отмытых эритроцитов донора, для чего выдавливают из пипетки небольшую каплю эритроцитов и касаются ею дна пробирки, и добавляют 4 капли (0,2 мл) сыворотки реципиента. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, после чего их помещают на 45 мин в термостат при температуре +37°С. По истечении указанного времени эритроциты вновь трижды отмывают и готовят 5% взвесь в физиологическом растворе. Далее 1 каплю (0,05 мл) взвеси эритроцитов на фарфоровую пластинку, добавляют 1 каплю (0,05 мл) антиглобулиновой сыворотки и перемешивают стеклянной палочкой. Пластинку периодически покачивают в течение 5 мин.

Учет результатов проводят невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что кровь реципиента и донора несовместимы, отсутствие агглютинации является показателем совместимости крови донора и реципиента.

4.4. Проба на совместимость с применением 10% желатина

В пробирку вносят 1 небольшую каплю (0,02 – 0,03) мл эритроцитов донора, для чего выдавливают из пипетки небольшую каплю эритроцитов и касаются ею дна пробирки, добавляют 2 капли (0,1 мл) желатина и 2 капли (0,1 мл) сыворотки реципиента. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, после чего их помещают в водяную баню на 15 мин или термостат на 30 мин при температуре +46 – 48°С. По истечении указанного времени в пробирки добавляют 5 – 8 мл физиологического раствора и перемешивают содержимое путем 1 – 2-кратного переворачивания пробирок.

Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что кровь реципиента и донора несовместимы, отсутствие агглютинации является показателем совместимости крови донора и реципиента.

4.5. Проба на совместимость с применением 33% полиглюкина

В пробирку вносят 2 капли (0,1 мл) сыворотки реципиента 1 каплю (0,05) мл эритроцитов донора и добавляют 1 каплю (0,1 мл) 33% полиглюкина. Пробирку наклоняют до горизонтального положения, слегка потряхивая, затем медленно вращают таким образом, чтобы содержимое ее растеклось по стенкам тонким слоем. Такое растекание содержимого пробирки по стенкам делает реакцию более выраженной. Контакт эритроцитов с сывороткой больного при вращении пробирки следует продолжать не менее 3 мин. Через 3 – 5 мин в пробирку добавляют 2 – 3 мл физиологического раствора и перемешивают содержимое путем 2 – 3-х кратного перевертывания пробирки, не взбалтывая.

Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что кровь реципиента и донора несовместимы, отсутствие агглютинации является показателем совместимости крови донора и реципиента.

До проведения гемотрансфузии следует установить группу крови (ГК) реципиента, донора и провести ряд проб на индивидуальную совместимость. Рассмотрим каждую из этих проб подробнее.

Определение ГК донора и реципиента

Вначале медицинский работник проводит определение ГК пациента по антигенам группы AB0. Самыми распространенными являются два метода – определение ГК при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток и с использованием цоликлонов.

Методика проведения проб с использованием стандартных сывороток и планшеток

При использовании изогемагглютинирующих сывороток применяются стандартные сыворотки и специальные белые гладкие эмалированные тарелки со смачиваемой структурой, размеченные по 4 группам соответственно.

Порядок действий врача следующий:

1. Врач указывает на тарелке ФИО пациента.
2. Капает по 1 капле сывороток 0, А и В, причем используется 2 серии сывороток (получается 6 капель).
3. Берет кровь у реципиента (капиллярную или венозную).
4. Полученную каплю крови помещает в центр тарелки и смешивает отдельно с каждым образцом сыворотки (причем объем сыворотки нужно брать в 10 раз больше, чем объем капли крови).
5. Перемешивает каждую пару сыворотка-кровь отдельной палочкой. Агглютинация начинается через 10-30 сек.
6. В капли, где наблюдается агглютинация, добавляет по 1 капле физраствора и оценивает результаты.

Четвертая сыворотка (АВ) используется только если агглютинировали три предыдущие сыворотки для проверки результата. Отсутствие агглютинации со стандартной сывороткой означает отсутствие соответствующего агглютинина на эритроците. То есть, например, кровь группы 0(I) не будет агглютинировать ни с одной из используемых сывороток.

Цоликлоны, использующиеся при определении групп крови

Также возможны постановки проб с цоликлонами (анти-А и анти-Б). Процедура определения ГК будет похожа на описанную выше.

Отсутствие агглютинации с цоликлоном будет также означать отсутствие однобуквенного агглютинина на эритроците. Так, кровь III группы будет давать агглютинацию только с анти-В цоликлоном.

При проверке резус-фактора в медицине применяется так называемый ускоренный метод со стандартным универсальным реагентом .

Для этого в цетрифужную пробирку объемом не более 10 мл капают 1 каплю реагента (универсальной антирезусной сыворотки четвертой группы, с 33% декстраном — полимерным углеводом) и капают туда 1 каплю крови пациента. Затем круговым движением смешивают и разносят смесь по стенкам пробирки, затем ждут 3 минуты. На следующем этапе добавляют в емкость 2-3 мл физраствора и переворачивают емкость 2-3 раза, избегая взбалтывания. При наличии видимых лепестков агглютинации делают вывод о том, что резус-фактор положительный.

Кровь донора обязательно маркируется

Группа крови донора обычно определяется заранее, и на пакете с кровью должна быть нанесена соответствующая маркировка. Так, II группа обозначается синим, III – красным, а IV имеет желтую полоску.

Перед переливанием нужно визуально оценить ее качество: кровь, подходящая для переливания сверху желтоватая (слой плазмы), а внизу — темно – красная, собственно осадок из эритроцитов.

Однако, если в пакете видны сгустки, хлопья или пленки, а так же если плазма розовая (признак гемолиза), то такую кровь нельзя использовать.

Контрольное установление группы крови донора проводят после полного размораживания пакета. Каплю для анализа берут не из основного, а из маленького дополнительного отсека пакета. Методика определения аналогична таковым при определении у реципиента.

Результаты контрольного определения должны совпасть с информацией на флаконе. После успешного контрольного определения, приступают к выполнению проб на совместимость.

Пробы на индивидуальную совместимость

Пробы на индивидуальную совместимость проводятся по двум системам: по системе АВ0, а также по резус-фактору донора и рецепиента.

По системе АВ0

Центрифуга, которая используется для определения групп крови

При проведении пробы на индивидуальную совместимость по системе AB0 (также известной как холодовая проба) :

• Берут 3-5 мл свежей крови реципиента, центрифугируют ее
• забирают каплю получившейся сыворотки.
• Затем капля наносится на белую тарелку рядом с небольшой каплей крови донора, капли смешиваются
• Спустя 5-10 секунд оценивается, изменился раствор или нет.
• Если «слипания» красных клеток крови не произошло, то можно переходить к проведению пробы на установление индивидуальной совместимости по резус-фактору.

По резус-фактору

Известно два общепринятых способа определить совместимость по резус-фактору.

Первый подразумевает использование центрифуги. Для этого в пробирку для центрифугирования помещают 2 капли сыворотки пациента, 1 каплю крови из флакона, 1 каплю 33% декстрана и центрифугируют 5 минут. После этого к смеси добавляют 3-4 мл физраствора и оценивают результаты. При отсутствии агглютинации можно перейти к пробе на биологическую совместимость.

Второй метод (так называемая тепловая проба) заключается в следующем. В колбочку помещается 1 капля крови донора, 2 капли теплого 10% раствора желатина и пара капель сыворотки реципиента. Смесь инкубируют в течение 10 минут на водяной бане, где поддерживается температура +46-+48 градусов, а затем также вносят 5 мл физиологического изотонического раствора. Оценка результатов проводится аналогично пробе с центрифугой.

Проба на биологическую совместимость

Перед процедурой переливания крови необходимо провести биологическую пробу

Проба на биологическую совместимость, по сути — это первый этап непосредственно гемотрансфузии и проводится исключительно врачом. Врач, проводящий пробу, выполняет следующие действия:

• подсоединяет капельную систему и вводит первые 15-20 мл донорской крови струйно;
• останавливает трансфузию;
• ждет 3-5 минут, наблюдая за пациентом. Насторожить должны появление тахикардии, затруднения дыхания, болей в пояснице, озноба или жара.
• если все протекает благополучно, пробу считают положительной и выполняют дальнейшую трансфузию

Таким образом, если все пробы на совместимость прошли благополучно, можно проводить переливание крови. Правильная скорость переливания составляет 50-70 капель в минуту.

Конечно, существуют не только группы, описанные в системах AB0 и резус-фактора, так как всего на сегодняшний день описано 250 групп крови. Однако, проведение описанных выше проб на совместимость позволяет выявить несовместимость и по большинству других агглютининов и агглютиногенов, что в итоге делает гемотрансфузиологические мероприятия относительно безопасной процедурой при правильной подготовке.

Из видео вы узнаете как происходит процедура определения совместимости групп крови по резус-фактору:

Заметили ошибку? Выделите ее и нажмите Ctrl+Enter, чтобы сообщить нам.

В нашей статье мы хотим поговорить об опасном заболевании ― гемолизе крови. Мы расскажем о причинах его появления, главных симптомах, и методах его лечения.

На сегодняшний день существует много заболеваний, которые поражают человеческий организм. Некоторыми из них люди могут болеть по несколько раз в год (вирусные), другие имеют хроническую форму, а есть и такие заболевания, которые имеют приобретенный характер или избирательно поражают человеческий организм.

Несмотря ни на что, болеть никому не хочется, будь то обычная простуда, или более серьезные проблемы со здоровьем. К сожалению, никто нас не спрашивает, и не предупреждает о появлении того, или другого заболевания, не исключение ― гемолиз крови.

С одной стороны он является жизненно необходимым физиологическим процессом, но это только тогда, когда эритроциты, как полагается, живут 120-130 дней, затем гибнут своей смертью. Иногда происходит не так, как бы нам этого хотелось, и мы сталкиваемся с очередной проблемой.

Гемолиз ― (разрушение или распад), в результате данного процесса происходит разрушение эритроцитов крови (красных кровяных телец), что обусловливает попадание гемоглобина в окружающую среду. В естественных и нормальных условиях продолжительность жизни кровяного тельца внутри сосудов составляет 125 суток, а потом наступает «смерть» ― гемолиз (свертывание крови).

Виды гемолиза

1. Внутрисосудистый ― происходит разрушение эритроцитов, которые находятся в циркулирующей крови. Если в плазме крови находится очень много свободного гемоглобина, а в мочи повышенное содержание гемосидерина, то это является главными признаками внутрисосудистого гемолиза.
2. Внутриклеточный гемолиз ― происходит в селезенке, костном мозге, печени, иными словами в клетках систем фагоцитирующих макрофагов. Данный вид патологического гемолиза передается через наследственность, и обычно сопровождается увеличением печени и селезенки.

На сегодняшний день известно огромное количество причин преждевременного гемолиза эритроцитов в кровяном русле. Иногда они способны поражать своим происхождением.

Причины возникновения патологического гемолиза

• Паразиты, например ― малярийный плазмодий.
• Отравление инфекционными агентами (токсоплазмоз, вирусные гепатиты В и С, гемолитический стрептококк…).
• Разнообразные яды и сильные токсические вещества (уксусная эссенция, бензин, соединения мышьяка и свинца).
• Ревматические болезни.
• Передозировка или хроническое употребление некоторых лекарственных препаратов.
• Бактериальные токсины, стрептококковый или брюшной тиф.
• Ядовитые грибки.
• Аутоиммунные реакции;
• Укусы ядовитых насекомых, скорпионов, змей или тарантулов, которые не обитают на той территории, где человек живет.
• Резус конфликт между малышом и матерью (гемолитическая желтуха плода).
• Гемотрансфизиологическая реакция ― переливание крови разных групп, что поспособствует свертыванию крови и мгновенной смерти человека.
• Самым тяжелым для пациента является выработка организмом антител к своим же кровяным тельцам и клеткам эритроцитарного ряда. К тому же эта патология заключается в выделении большого количества гемоглобина вместе с мочой.

Чтобы наверняка знать, что ваши кровяные тельцы в порядке, и они полностью проходят свой жизненный цикл, при этом пронося только пользу вашему организму необходимо знать основные симптомы патологического гемолиза.

Симптомы гемолиза

1. Легкая форма заболевания характеризуется такими симптомами: озноб, усталость, слабость, тошнота, иногда возникает рвота и диарея.
2. Для массивного гемолиза характерным признаком является скрытый период заболевания в начальной стадии, который длится от шести до восьми часов. По истечению указанного времени появляется головная боль и слабость, которая имеет тенденцию к нарастанию. В большинстве случаях массивного гемолиза у больного наблюдается сильная тошнота и рвота. Если своевременно не обратится к специалисту, то следующим симптомами будут боль в правом подреберье и окрашивание мочи в темно-красный цвет.
3. Следующим симптомом болезни является нарастание эритропении, которая возникает, как следствие распада эритроцитов. Вследствие проведения врачом анализа крови, почти в 100 % случае обнаруживается ― ретикулоцитоз. Ретикулоцитоз ― значительное увеличение в циркулирующей крови незрелых эритроцитов (ретикулоцитов), что свидетельствует о повышении образования молодых красных клеток крови в костном мозге. Спустя первые сутки, следующими симптомами является повышение температуры до 38 градусов. Затем увеличивается печень, и нарушаются ее функции, в некоторых случаях развивается пачечная недостаточность. Если не предпринимать никаких мер, то спустя 3–4 сутки появится желтуха и билирубин в крови.
4. Продукты распада гемоглобина закупоривают канальцы почек, таким образом, развивают почечную недостаточность с олигурией. Олигурия ― такое состояние организма, что характеризуется резким замедлением образования в нем мочи. Данный нарушенный процесс в человеческом организме является признаком широкого ряда заболеваний мочевыделительной системы. В конечном результате может возникнуть анурия ― отсутствие поступления мочи в мочевой пузырь, или очень незначительное ее поступление.

Очень интересный и тот факт, что гемолиз может иногда случатся вне человеческого организма, например при заборе анализа крови. В таких случаях анализ будет не точным и не достоверным, или вообще не получится. В основном вина за свертывание крови ложится на людей, которые работают с кровью в дальнейшем, после проведенного забора.

Основными причинами свертывания крови, после забора крови, являются:

• недостаточное количество консервантов в пробирке;
• очень быстрый забор крови;
• нестерильность и недостаточная чистота пробирки;
• нарушение условий асептики во время забора крови;
• употребление жирной пищи перед забором крови;
• нарушение условий транспортировки или условий хранения крови;
• пренебрежения температурным режимам.

Такое «халатное» отношение к проведению клинических анализов крови приводит к необходимости проведения повторных процедур, что очень нежелательно, особенно у малышей. По этому, медицинский персонал должен, относится к своим обязанностям и работе с полной ответственностью, и серьезностью.

Лечение гемолиза

Первое, что должен сделать лечащий врач, это устранить причину данного заболевания, и сделать все возможное, чтобы устранить для больного неприятные симптомы болезни. Затем применяются препараты-иммуносупрессоры, что угнетают иммунитет, и проводится заместительная терапия (переливание компонентов крови, и консервированных эритроцитов). Если гемолиз сопровождается критическим снижением гемоглобина, одним из самых эффективных методов лечения является переливания эритроцитарной массы. Расчетность переливания проводится так: 10 мл на 1 кг массы тела человека.

Независимо от того, болеете вы патологическим гемолизом, или нет, всегда будьте внимательными к себе, и прислушиваться к «внутренним сигналам», которые вам подает ваш организм. Никогда не игнорируйте эти «сигналы», ведь речь может идти не только о вашем здоровье, но и о вашей жизни.

Узнайте больше о строении и функции эритроцитов из этого видео: