26-07-2019
0 Просмотров
0 комментариев
0 Рейтинг
Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях.
ИФА — один из самых распространенных и точных методов для выявления инфекций, передающихся половым путем, в частности ВИЧ, ВПЧ, гепатита В.
Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.
Спецпредложения, скидки и акции помогут существенно сэкономить на медицинском обследовании.
Контроль качества лабораторных исследований, осуществляемый по международным стандартам, — дополнительная гарантия точности результатов анализов.
Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.
Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа
Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).
Чтобы понять, как устроен иммуноферментный анализ, попробуем разобраться в сути реакции «антиген-антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило, белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом. Частицы чужой крови (если она не совпадает с нашей по группе) также являются антигенами. В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»). Такие иммунные комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.
Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.
Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.
Также существуют иммуноглобулины класса А (они в большом количестве содержатся в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму), Е (борются с паразитарными инфекциями) и другие. В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также узнать, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом (например, краснухой или ветряной оспой).
Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.
Реакцию «антиген-антитело» можно воспроизвести в лабораторных условиях: использовать уже готовые антитела или антигены, чтобы определить, есть ли в исследуемом образце соответствующее им соединение.
Для начала необходимо получить образец биологической жидкости — обычно, это сыворотка крови. Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или — антитела, в случае если задачей является поиск антигена). Образцы вносятся в лунки, где происходит — или не происходит — образование иммунных комплексов. Если «встреча» состоялась, особое красящее вещество вступает в ферментную реакцию с объединенной молекулой, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать выводе о результатах анализа.
ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.
Преимущества метода
Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.
ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке. Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.
Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.
Недостатки метода
К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.
В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.
ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.
Показания к назначению и выявляемые заболевания
Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:
- Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:
- IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
- IgG к ВИЧ;
- Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
- Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
- Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
- Ig M и IgG к токсоплазмозу;
- Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
- IgG к паразитарным заболеваниям;
- Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
- IgG к хеликобактерной инфекции.
- Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний.
- Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других).
- Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).
Анализируемый биоматериал и особенности его забора
Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.
Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.
Сроки готовности результатов ИФА
При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.
Расшифровка иммуноферментного анализа
Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).
Анализируемые показатели
- IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
- IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.
- IgM и IgA (совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
- IgG говорит либо о хронизации заболевания либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.
Возможные результаты ИФА
В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.
Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).
Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.
Где можно сдать биоматериала на иммуноферментный анализ?
Информативность ИФА делает этот анализ важным инструментом в работе многих медицинских центров. Но можно ли доверять такую диагностику государственным лабораториям или лучше самим выбрать, где провести такое исследование?
«Хронические инфекции — большая проблема современной медицины. Когда по разным причинам не удается вовремя поставить диагноз, болезнь переходит в вялотекующую стадию и постепенно подтачивает организм, — рассказывает специалист сети независимых лабораторий «ИНВИТРО». — В поликлиниках и стационарах, работающих в рамках общественной системы здравоохранения, не всегда есть ресурсы для целенаправленного поиска таких инфекций, поэтому бывает, что врачи предоставляют разбираться с проблемой самостоятельно. Но не стоит обращаться в первую попавшуюся частную лабораторию, конечно, если вам не нужен сомнительный результат, который никак не поможет в диагностике. Только те медицинские центры, которые работают в соответствии с международными стандартами качества, могут провести ИФА по всем правилам, избежав ошибок и искажений в процессе анализа. Так, наша лаборатория «ИНВИТРО» одной из первых предложила пациентам проведение ИФА в частном порядке, и за минувшие двадцать лет мы завоевали безупречную репутацию и помогли сотням тысяч человек».
Для оценки способности организма сопротивляться инфекционным болезням или для определения фазы патологии применяют анализ крови. Метод ИФА занимает важное место среди лабораторных исследований, он помогает всесторонне изучить деятельность защитной функции крови, определить иммунодефицит при инфекционных заболевания, недугах крови, гормональных, аутоиммунных процессах.
Что такое иммуноферментный анализ крови
Этот метод относится к лабораторным исследованиям, определяет наличие защитных факторов крови белковой природы (антител) к определенным болезнетворным агентам (антигенам). Иммуноферментный анализ крови определяет иммуноглобулины, которые могут обнаруживаться в виде иммунокомплексов. Появляются они при возникновении сложных нейрогуморальных реакций иммунной защиты человека, которые становятся ответом на внедрение чужеродных антигенов.
Против каждого вида болезнетворного агента производятся в организме специфические антитела. Далее происходит связывание патологического микроорганизма или антигена, образуется комплексное соединение «антиген-антитело». Затем оно нейтрализуется, происходит ферментативный лизис, реакция фагоцитоза, и заканчивается процесс выводом из организма. Наличие конкретных комплексов, определяющееся ИФА, говорит о виде возбудителя, вредного вещества у больного.
Классы иммуноглобулинов
Учеными обнаружено и изучено 5 видов иммуноглобулинов: IgE, IgD, IgG, IgM, IgА. Существуют и другие классы, но они находятся еще на стадии исследования, и не до конца выяснена их роль. В практической медицине важное значение имеют А, М, G. Информативность, точность определения базируется на временных промежутках, за которые они появляются, достигают максимума и исчезают.
- Иммуноглобулины IgA (А) – выполняют защитную функцию слизистых мочевыделительной системы, желудочно-кишечного тракта, дыхательных путей. Выявить их при остром начале патологии нельзя, они образуется только через 2 недели после первых признаков болезни, в некоторых ситуациях еще позже. Сосредоточен глобулин А в слизистых тканях (около 80% от общего количества). Оставшаяся часть находится в крови, чтобы обезвреживать и уничтожать микроорганизмы. К 8 неделе после стихания острой фазы патологии количество этих иммуноглобулинов уменьшается до полного исчезновения.
- Первым и главным маркером острого периода развития болезни становятся глобулины IgM (M). Анализ их показывает на 5 сутки после начала появления первых признаков патологии. Выявляет ИФА эти иммуноглобулины первые 6 недель, затем они быстро исчезают.
- Класс иммуноглобулинов IgG (G) показывает остаточный иммунный ответ в крови на патологический процесс. Анализ покажет фактор спустя месяц после начала болезни. Потом они могут еще долгие месяцы, года и даже всю жизнь определяться в анализе. Они защищают человека от рецидива недуга, иногда обеспечивают невозможность вторичного развития патологии. При определении роста иммуноглобулина G подозревают повторное заражение патологией. Для подтверждения проводят несколько проб ИФА с промежутком в 2 недели.
- В паразитологии и аллергологии используется иммуноглобулин IgE (E).
- Иммуноглобулин IgD (D) находится на В-лимфоцитах, небольшая концентрация встречается и у здоровых людей. Достигает максимальных значений после 10 лет жизни человека. При анализе ИФА отмечается рост иммуноглобулина D у пациентов с системными патологиями соединительной ткани, во время беременности, при бронхиальной астме, недугах, которые спровоцированы иммунодефицитным состоянием.
Показания к исследованию крови методом ИФА
При помощи этого анализа можно оценивать эффективность лечения, проводить комплексное исследование перед трансплантологическими операциями, определять состояние иммунодефицита и антитела к более 600 видов аллергенов. Исследование крови методом ИФА использует в качестве дополнительного способа обнаружения онкологических клеток. Назначают анализ при необходимости обнаружения антител к микробам, которые провоцируют венерические патологии:
- трихомониаз;
- сифилис;
- токсоплазмоз;
- микоплазмоз;
- уреаплазмоз.
При глистных инвазиях в анализе ИФА будет отмечен рост количества иммуноглобулинов. Проводится исследования для подтверждения наличия у больного:
- вируса Эпштейна-Барра;
- герпетических инфекций;
- цитомегаловируса;
- группы вирусных гепатитов.
В паразитологии
Анализ ИФА используется в диагностике паразитарных патологий, показателем становится специфический иммуноглобулин IgE. Отмечается его рост в крови при заражении организма пациента паразитами. Иммуноглобулин Е становится маркером атопической реакции при аллергических процессах. Содержание в крови – незначительное. Локализуется, как правило, на слизистых оболочках, макрофагах, базофилах.
Основная функция белкового комплекса – защита слизистых оболочек организма. Также он участвует в иммунных реакциях, которые направлены на уничтожение паразитов. Отвечают за активизацию IgE макрофаги и эозинофилы. При сопоставлении с данными анализа этот факт помогает установить диагноз. Анализ ИФА используют для обнаружения:
- хронической, острой формы описторхоза;
- круглых гельминтов: остриц, аскарид;
- лямблий;
- трихинеллеза;
- амебиаза;
- форм лейшманиоза;
- содержания токсоплазм.
Анализ крови методом ИФА
Иммуноферментное исследование крови не единственный вариант для определения иммуноглобулинов. Иногда для этого исследования делают забор спинномозговой жидкости, ткани стекловидного тела, околоплодных вод. При использовании крови набирают ее из локтевой вены при помощи инъекционной иглы. Сдавать анализ необходимо натощак, перед ИФА не рекомендуется принимать медицинские препараты, которые могут повлиять на результат. Следует отказаться от алкоголя, курения, употребления наркотических веществ перед сдачей биоматериала. Варианты результатов теста:
- При отрицательных показателях иммуноглобулинов IgG, IgM, IgA, врачи говорят об отсутствии патологии или начальной стадии. Такой же результат (отрицательный) будет после полного выздоровления по прошествии длительного периода.
- Если IgG проявляется положительно, а IgM и IgA не обнаружены, это указывает на образование иммунитета после прививки или инфекционной болезни.
- При высоких титрах IgM и отрицательных IgA, IgG ставят диагноз острого инфекционного заболевания.
- При положительном показателе IgG, IgM, IgA врачи говорят об острой фазе рецидива уже имеющегося хронического недуга.
- При хронической инфекции, которая находится на стадии стихания (ремиссии), анализ ИФА показывает отрицательные титры IgM, а IgA и IgG будут положительными.
Преимущества и недостатки ИФА анализа
Основным отрицательным моментом этого исследования является вероятность получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов. Причиной недостоверности становится прием медикаментов, технические недочеты лаборатории. Фальсифицировать анализ может процесс нарушения метаболизма в организме. Главными достоинствами анализа ИФА являются:
- точность, диагностическая специфичность;
- невысокая себестоимость анализа;
- скорость получения результатов;
- возможность динамического контроля стадии патологии, эффективности лечения;
- простота исследования;
- возможность выполнять массовые обследования очагов инфекции;
- безболезненность, безопасность для больного;
- применение при обработке информационных технологий.
Благодаря развитию современной медицины, врачу при постановке диагноза больше не нужно ориентироваться на косвенные проявления заболеваний или проводить многоступенчатые лабораторные исследования. Достаточно провести один анализ, который подтвердит или опровергнет предполагаемый первоначальный диагноз.
Таким методом является иммуноферментный анализ (ИФА) — это исследование позволяет обнаружить специфические антитела и антигенны свойственные при разнообразных патологиях, что во многом ускоряет установку диагноза.
Что такое ИФА
ИФА анализ — это такое лабораторное исследование (метод), которое помогает определить присутствие или отсутствие определённых антител в организме для борьбы с вирусом и их количество.
Основой исследования является естественная реакция антиген (вредоносный организму объект) – антитело (белок уничтожающий вредоносные объекты), позволяющая выявить присутствие разнообразных вирусов, бактерий.
ИФА представляет собой естественный иммунный ответ организма – взаимодействие антитела с соответствующим антигеном. Так во время ИФА в пробирку с материалом добавляются поочередно антигены или антитела, после чего происходит выявление концентрации получившихся комплексов антиген-антитело.
Если совпадения образовались, то возникают иммунные комплексы, далее происходит ферментная реакция красящего вещества с объединённой молекулой. Именно благодаря изменению цвета в ходе ферментативной индикации происходит идентификация заболевания после исследования уровня определяемого соединения.
Виды иммуноглобулинов
Иммуноглобулины человека дифференцируются на несколько классов, отличающихся друг от друга свойствами, структурой и антигенными особенностями тяжелых цепей (Н-цепи). У всех млекопитающих, в том числе и человека, выделяют пять Н-цепей, которые и определяют принадлежность иммуноглобулинов к соответствующему классу: G, М, A, D, Е.
Каждый класс отличается друг от друга биологическими свойствами, и способностями связывать антигены, и скоростью и прочностью связи с молекулой.
Функции каждых иммуноглобулинов (lg) различны:
| Кол-во в организме | Функции | Период полураспада (дней) | Значение |
| G | 70% | Формируют пассивный иммунитет у новорожденного; |
необходимы для иммунного ответа
улучшают фагоцитоз,
способны связать 5 молекул антигена,
нужны для формирования раннего иммунитета
Образование местного иммунитета
Возникновение иммуноглобулинов происходит по своеобразной «цепочке» — lgM lgG, именно так реагирует организм на появление в организме антигена. Во время лабораторной диагностики проводится оценка концентрации трех основных иммуноглобулинов – G, M, A.
Показания к сдаче анализа на иммуноглобулины
ИФА-анализ с каждым годом становится все более популярным.
Такое исследование ускоряет постановку диагноза, а это очень важно для терапии таких патологий как:
- вирусный гепатит;
- ВИЧ-инфекция;
- цитомегаловирус,
- вирус Эпштейна-Барр,
- вирус герпеса,
- корь
- краснуха,
- туберкулез,
- сальмонеллёз,
- дизентерия,
- клещевой энцефалит,
- бактерии хеликобактер,
- боррелиоз,
- столбняк,
- сифилис,
- дифтерия,
- лептоспироз,
- хламидиоза,
- уреаплазмоз,
- микоплазмоз,
- коклюш.
Так же анализ позволяет определить инфицирование паразитами:
- плоскими червями
- аскаридами
- гистолическими амебами,
- печеночными тремадами,
- лямблиями,
- токсоплазмами,
- трихинеллами,
- двуусткой,
- цестодозами.
ИФА является своеобразным маркером аутоиммунных патологий и злокачественных новообразований.
Подготовка к сдаче анализа
При подготовке к исследованию следует придерживаться таких правил:
- за сутки до забора крови нельзя курить и употреблять алкоголь,
- не заниматься спортом или другими физическими нагрузками,
- стараться не допускать стрессов,
Перед тем как сдать ИФА анализ, нужно избегать стрессов.
Так же врачи рекомендуют придерживаться специальной диеты – исключить жирную и жареную пищу, а если исследование проводится на гепатиты, то необходимо не употреблять любые оранжевые овощи и особенно цитрусовые. Сдавать кровь следует с утра на голодный желудок.
Ложноположительным анализ бывает из-за невыполненных рекомендаций, особенно употребления жирной пищи, что приводит к слишком большой концентрации триглицеридов в плазме, из-за чего проводимость ИФА снижается.
Порядок взятия пробы
В качестве исследуемого материала может использоваться цельная кровь, сыворотка или плазма венозной крови. Забор материала, обычно проводится из локтевой вены, для этого применяется одноразовая игла и вакуумная пробирка, необходимо 5-10 мл крови.
Для точности результата важно придерживаться правильной техники взятия пробы – прокол самого сосуда и окружающих тканей должен быть произведен одной манипуляцией, поэтому используется короткая игла с большим диаметром, благодаря чему не травмируется противоположная стенка вены и не повреждаются эритроциты.
Так же для сохранения целостности эритроцитов, нужно чтобы кровь стекала по стенкам пробирки.
Во время хранения материала следует избегать возможной его ионизации, кроме того материал не должен контактировать с остатками дезинфицирующих средств, поэтому используется только одноразовая пластиковая пробирка, с маркировкой ФИО пациента, датой и временем сдачи материала.
Если необходимо непродолжительное хранение исследуемого материала, то используется холодильная камера с температурой 2-4 о С, если необходимо более продолжительное хранение, то материал замораживается при температуре -20 о С.
Как делают анализ
После подготовки исследуемого материала врач-лаборант приступает к необходимым манипуляциям. Для этого используются ряд специальных наборов антигенов, обдающих свойством спровоцировать ответные реакции организма на раздражитель, это разнообразные инфекции, гормоны, аллергены.
Схема ожидаемой реакции «антиген-антитело» выглядит приблизительно так:
- Первичная реакция — определяемый Ig (Ab) и очищенный антиген возбудителя (Ag).
- Для обнаружения получившихся иммунных комплексов далее следует новая иммунологическая реакция, где антигеном выступает связанный специфический Ig, а антителом для него выступает коньюгат- Ig (Ab).
- Последний этап — ферментативная реакция, вместе с катализатором молекулой коньюгата. Субстратом выступает хромоген (не окрашенный), который в процессе протекания реакции окрашивается, и интенсивность цвета и определяется количественный показатель иммуноглобулина в пробе.
В настоящий момент разработано множество разнообразных вариантов ИФА, четкая классификация их отсутствует. Обычно, методы рассматриваются исходя из разделения её на гетеро- и гомогенные — все фазы анализа происходят с применением твердой фазы или с использованием только раствора.
Современные клинико-диагностические лаборатории обычно используют гетерогенный (твердофазный) ИФА, в нем под твердой фазой подразумевается абсорбция антигенов или антител на твердой поверхности специальных лунок, расположенных на полистироловом микропланшете, метод подразделяется на прямой и непрямой ИФА.
При прямом ИФА, вносимый антиген закрепляет в период инкубационного процесса на поверхности пустых лунок, для этого исследуемые пробы материал помещают в чистые лунки на 20-25 минут, это нужно для прикрепления антигена к их поверхности. После этого происходит добавление необходимого антитела. Далее материал остается на определенное время для образования связей.
Антитела всегда добавляют в избытке, поэтому даже при их наличии в пробе остаются не связанные антигены, а если антигенов нет совсем, то связей не будет. Чтобы удалить«лишние» антитела проводится декантация, после чего остаются только те антитела, которые создали связь с антигеном.
После этого следует ферментативная реакции – добавление в лунки раствора с ферментом, после чего происходит окрашивание полученных связей.
При непрямом методе ИФА используемые антитела, заранее соединенные с субстратом ферментативной реакции; в этом случае связь антител с антигеном происходит в период инкубационного процесса, после чего происходит мобилизация связей на поверхности лунок, а вносимый после конъюгат и субстратно-хромогенный реагент окрашивают реакцию.
Таким образом, главным отличием непрямого от прямого метода является не приклеивание материала к поверхности чистых лунок, а связывание с антигеном, иммобилизованным на планшете.
Останавливается протекание реакции с применением специализированных устройств, далее каждая лунка подвергается процессу фотометрирования, за которым следует сравнительная характеристика полученного результата с проведенными ранее контрольными пробами.
Если обнаруживается повышение оптической плотности в пробе, то завышена и концентрация специфических антител в исследуемом результате.
Когда будет готов анализ
Проведение исследования не занимает много времени, от забора крови до получения результата проходит от 1 до 10 дней, в зависимости от диагностических мероприятий.
Результаты теста и их расшифровка
На полученном пациентом бланке-результате диагностики указывается отрицательный либо положительный результат на определенные классы иммуноглобулинов, так же указывается количественный показатель различных классов антител.
Возможны различные интерпретации результатов:
- IgM (+) (IgA, IgG не определялись) – процесс выздоровления;
- IgM (-) ;IgG (+), IgA (+) – хроническая инфекционная патология;
- IgM, IgG, IgA (все с – значением) – отсутствие защитных механизмов к инфекциям;
- IgG (+/-) и IgA (+/-), IgM (+) – острый процесс;
- IgM (-), IgA(-),IgG(+) – постинфекционный иммунитет;
- IgM, IgG, IgA (+) – хроническая патология в стадии обострения.
Так, например, если были обнаружены IgG и IgM, то возможно у пациента одно из таких заболеваний:
- вирусный гепатит;
- цитомегаловирус;
- герпес;
- ветряная оспа;
- хламидиозом;
- стафилококковая или стрептококковая инфекция.
Иммуноферментный анализ часто назначается при гормональных исследованиях, нормы показаны в таблице:
| Название гормона | Пол | Норма | |
| 1 | тиреоглобулин | м/ж | До 70 МЕ/мл |
| 2 | тироксин | м/ж | 64-146 нмоль/л |
| 3 | трийодтиронин | м/ж | 1,8-2,8 нмоль/л |
| 4 | Свободный тироксин | м/ж | 11-25 пмоль/л |
| 5 | Свободный трийодритонин | м/ж | 4,49-9,3 пмоль/л |
| 6 | Тестостерон, дегидротестостерон | Ж | 0,5-10 мЕд/л |
ИФА анализ — это такое диагностическое исследование, которое позволяет оценить вероятность образования онкологических патологий. Однако интерпретация результатов проводится только лечащим врачом.
Значение результатов теста
ИФА подходит для выявления разнообразных форм половых инфекций, в том числе сифилиса, часто используется и для скрининга беременных.
Благодаря этому исследованию можно узнать, как давно произошло заражение и стадия заболевания на момент исследования:
- иммуноглобулины М говорят о длительности заболевания;
- IgA — пациент заразился более 30 дней назад;
- IgG обнаруживается на «пике» заболеваний, или же в тот момент, когда терапия окончилось недавно.
В процессе исследования лунки на планшете с отрицательным показателем остаются бесцветные, а положительные окрашиваются в ярко-желтый цвет. Если цвет положительных лунок не совпадает с цветом контроля, то результат считается сомнительным и необходимо повторное исследование.
Иммуноферментный анализ — это первая ступень в диагностике ВИЧ. Проводить анализ нельзя сразу же после предполагаемого заражения необходимо дождаться окончания инкубационного периода (от 14 дней до 6 месяцев).
В ходе анализа определяются антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, происходит поиск АТ класса G, который обычно появляется на более поздних сроках и АТ класса А и М, они могут быть определены на ранних стадиях (во время инкубационного периода).
При получении положительных проб далее следует:
- если первый тест дал положительный результат, то кровь вновь перепроверяется другим лаборантом;
- повторный положительный результат предполагает пересдачу материала,
- при повторении результата, пациенту назначается иммуноблотинг.
Окончательный вывод о наличии ВИЧ-инфекции выдается только после результата иммуноблотинга.
ИФА также применяется в качестве диагностического исследования туберкулеза, но если у пациента даже и были выявлены антитела к данной патологии, то это не всегда подтверждает наличие у него туберкулеза, поэтому ИФА часто применяется качестве уточняющей методики, либо же для диагностики скрытой внелегочной формы.
ИФА анализ — это такое исследование, позволяющее обнаружить у пациента заражения паразитами и простейшими, в ходе диагностики можно определить даже время заражения.
| Цитомегаловирус | IgM обнаруживаются через 30-45 дней после заражения, либо во время реактивации инфекции в течение 4-6 месяцев | Плюсы и минусы анализа
ИФА имеет множество достоинств, что и объясняет его популярность среди врачей и пациентов, это:
Однако наравне с достоинствами существует и недостаток – в редких случаях анализ бывает ложноположительным или ложноотрицательным. Почему результат может быть недостовернымОшибки в результате могут возникать из-за технических нарушений, так же недостоверным анализ бывает у людей с некоторыми хроническими заболеваниями (ревматоидный фактор) для которых характерной является выработка специфических антител.
Так же на конечный результат оказывает влияние употребление пациентов медикаментов и нарушение метаболизма. По данным причинам положительный результат на ВИЧ и онкопатологии требует повторную сдачу проб. Стоимость исследованияЦена ИФА варьируется в зависимости от направления диагностики (руб.):
Иммуноферментный анализ крови один из самых эффективных методов исследований множества вирусных патологий, паразитарных инфекций, онкологических патологий. Такое исследование как ИФА во многом облегчает постановку диагноза, однако этот анализ не должен интерпретироваться пациентом самостоятельно, заниматься расшифровкой должен только врач. Автор статьи: Bacio Оформление статьи: Лозинский Олег Видео о ИФА анализеКак выполняется анализ ИФА: “> Комментарии
Похожие статьи
Adblock detector
|
