Метод рпга что это

Реакция прямой гемолитической агглютинации (РПГА) – распространённый метод исследования, используемый в лабораторной клинической диагностике. Метод агглютинации очень прост в своем исполнении, но при этом достаточно эффективен. В основном используется при эпидемических вспышках и в скрининговых исследованиях людей на различные инфекционные и бактериальные заболевания, такие как сифилис, дифтерия, менингококк, сальмонеллёз и т.д.

Еще один из плюсов этого анализа состоит в том, что можно не только определить наличие у человека заболевания, но и на какой стадии оно находится. Это очень помогает в выборе тактики лечения.

Суть метода

Человеческий организм обладает иммунной системой, именно она, столкнувшись с атакой вирусов или бактерий, защищает его. В итоге образуются специфические белки или антитела, именно их и определяют в крови человека.

Принцип метода РПГА основан на связывании антител, находящихся в организме, с антигенами микроорганизмов или риккетсий, которых ищут при подозреваемом заболевании. Если слипания между антителами и антигенами не происходит, значит, организм никогда не сталкивался с возбудителем.

В основном в реакции используются эритроциты, на оболочке которых уже наслоены антигены возбудителя. При взаимодействии с имеющимися антителами происходит склеивание и образуется видимый осадок.

Постановка реакции

Проводится реакции прямой гемолитической агглютинации на микропланшетах в специальных микролунках. Перед анализом готовится ряд десятикратных разведений исследуемой сыворотки.

В самом начале или конце планшета ставятся контроли. В положительный контроль добавляют сыворотку крови уже с антителами возбудителя. Отрицательный контроль состоит из физиологического раствора. Далее, в остальные лунки последовательно раскапываются разведенные эритроциты, с уже имеющимися антигенами. Планшет аккуратно перемешивается методом встряхивания и помещается в термостат для инкубации. После чего происходит контроль результатов.

Учет результатов

При учете результатов можно не только сказать, есть заболевание или нет, но еще и определить количество возбудителя. Соответственно, чем больше накоплено в организме антител, тем и результат будет больше. Считается численный результат в титре.

Например, при определении сифилиса у человека к сыворотке крови добавляют антигены трепонемы. Если у человека циркулирует заболевание, то в его крови накоплено уже достаточно антител. Поэтому антигены риккетсии и специфические антитела слипаются, образуя осадок – медицинским языком это называется агглютинацией.

Если учитывать результат в качественной реакции, то он отсчитывается по крестам «+». Определяется по выпавшему осадку в лунке. Положительным результатом считается осадок в виде равномерно распределенных агглютинированных эритроцитов. Напоминает раскрывшийся «зонтик». Отрицательный результат представлен в виде маленького кольца, который сконцентрирован на дне лунке. Он же напоминает «пуговку». Если реакция отчитывается как слабоположительная, то в лунке возникает что-то в виде плотного кольца, но при этом по краям образуются эритроциты.

Как сказано выше, учет ведется по четырем крестам:

• «+» – слабоположительная реакция, достаточно трудно по такому результату установить наличие, а тем более титр возбудителя. Обычно пациенту назначается пересдача через две недели. Если возбудитель присутствует, то за это время антитела в организме повысятся в несколько тысяч раз. Но результат может быть и ложноположительным. Причиной такой интерпретации является перекрёстная реакция. Она может появиться при наличии у человека:

• инфекционных заболеваний (ВИЧ, гепатиты);
• аутоиммунных заболеваний;
• новообразований;
• беременности;
• наркотических средств в крови.

Реакция проводится в сопровождении отрицательного и положительного контроля. В лунках с отрицательным должно быть плотное кольцо на дне, а при положительном – равномерное распределение эритроцитов по всему пространству лунки.

Показания

Анализ назначается пациентам при подозрении на наличие у них различных заболеваний. Проводится реакция в следующих случаях при:

• подозрении на сифилис, который проявляется в виде шанкра на слизистых оболочках половых органов, специфических кожных проявлений, алопеции;
• при контакте с инфицированными партнёрами;
• беременности;
• наркотическом или алкогольном опьянении;
• онкологических заболеваниях;
• энцефалите и боррелиозе;
• контроле уже переболевших людей.

Если есть подозрения или для большей достоверности, анализы для людей из «группы риска» рекомендуется пересдать через 4 недели, а затем держать на контроле и сдать кровь через три месяца.

Подготовка к анализу

Во избежание перекрестных реакций и неправильной трактовки результатов, пациент должен подготовится к анализу заранее. Кровь на этот вид анализа берется из вены.

Для этого нужно соблюсти несколько правил:

• анализ нужно сдавать натощак, накануне ограничившись легким, нежирным ужином;
• если есть необходимость, то можно пить воду без газов, но в малом количестве;
• за час до сдачи отказаться от курения, это минимальное время, лучше его увеличить;
• за день до анализа не употреблять алкогольные напитки и токсические препараты;
• отказаться от приема лекарственных средств, хотя бы в сам день сдачи. При невозможности, обязательно поставить врача, направившего на анализ, в известность.

Реакция прямой гемагглютинации является достоверным методом при исследовании различных инфекций в организме человека. Она широко применяется в диагностике.

Cергеева Екатерина Андреевна

Страничка оказалась полезной? Поделитесь ею в своей любимой соцсети!

Анализ крови РПГА – одно из важнейших исследований, которое помогает определить наличие патогенных возбудителей в организме.

Метод РПГА очень часто используется при подозрении на сифилис, инфицирование кишечного тракта, коклюш и другие опасные патологии. Когда выписывается направление на подобное исследование, пациенты интересуются, как сдают биоматериал и насколько достоверные результаты дает методика. Об этом и пойдет речь далее.

Что такое РПГА и какие имеет особенности

Далеко не каждый человек знает, что это такое и как расшифровывается аббревиатура РПГА. Под этим сокращением подразумевается реакция пассивной гемагглютинации, методика нужна для определения патогенного процесса в организме.

Этот тест выявляет антигены бледной трепонемы (люис) – патогенного микроорганизма, провоцирующего возникновение сифилиса. Если обследуемый здоров и не страдает от каких-либо хронических заболеваний, при попадании в организм бледной трепонемы иммунитет начинает активно вырабатывать антитела.

Наличие в исследуемом биоматериале антител бледной трепонемы – основание для диагностирования сифилиса.

Условно тестирование на сифилис можно разделить на 2 вида:

Классификация анализа на категории зависит от вида антител, обнаруженных в полученном образце крови. Несмотря на то что впервые такой метод диагностики был проведен в 1965 году, тестирование оказалось настолько эффективным и результативным, что сегодня оно до сих пор не теряет актуальности.

Несомненным достоинством диагностики является то, что она позволяет обнаружить инфекцию на любом этапе развития, в том числе в латентной стадии.

Показания к проведению

Врачи советуют сдать анализ РПГА в следующих случаях:

• у пациента проявляются клинические симптомы сифилиса (появление эрозий, язв, увеличение лимфоузлов) и регионарной лимфаденопатии; в этом случае РПГА на сифилис является незаменимым тестом, поскольку позволяет выявить болезнь на первичной, вторичной и третичной стадии;
• возникновение признаков очаговой или диффузной алопеции;
• если человек имел половой контакт с носителем сифилиса;
• человек хочет стать донором, сдавать кровь и плазму;
• РПГА входит в ежегодное профилактическое обследование, которое назначается работникам разных госучреждений;
• при оформлении медицинской книжки;
• при госпитализации.

Какие заболевания можно выявить в ходе диагностики

Чаще всего положительный результат теста свидетельствует о наличии сифилиса (в 70% случаев) — как врожденного, так и приобретенного, а также может говорить о таких патологиях:

• ВИЧ-инфекция;
• разные формы гепатита;
• недавно перенесенный инфаркт миокарда;
• возвратный тиф;
• туберкулез;
• наличие венерических заболеваний;
• клещевой боррелиоз;
• дифтерия;
• диффузные заболевания соединительной ткани;
• злоупотребление наркотическими веществами (вводимыми путем инъекций);
• наличие воспалительного процесса в ротовой полости или в районе гениталий;
• формирование новообразований злокачественной природы;
• инфекционный мононуклеоз.

Чтобы получить достоверные сведения, сдавать кровь нужно с учетом всех врачебных рекомендаций, в противном случае возбудитель сифилиса может быть не выявлен.

Почему для диагностики сифилиса назначается именно РПГА

Часто пациенты задаются вопросом, почему при подозрении на сифилис назначают именно РПГА. Специалисты уверяют, что тестирование является столь популярным, поскольку в 99% случаев дает правильный результат.

Реакция агглютинации не произойдет, только если в организме отсутствуют антитела трепонемы, в противном случае обследование обязательно покажет их присутствие.

Медицинская практика показывает, что чувствительность теста очень высока, причем положительная реакция будет выявлена даже при скрытых стадиях заболевания. Благодаря высокой результативности тест не теряет актуальности даже в настоящее время.

Использование РПГА при других патологиях

Сдачу биоматериала на данное исследование часто назначают при подозрении на коклюш, на брюшной тиф, на иерсиниоз (острое инфекционное заболевание ЖКТ). Такая востребованность обусловлена тем, что по чувствительности и результативности РПГА превосходит практически все серологические анализы.

Тест помогает определить большую часть недугов, вызванных патогенными клетками и риккетсиями. При этом в роли антигенов можно использовать ингредиенты бактериальных вакцин, бактериальные экстракты (с коревым или коклюшным диагностикумом), очищенные антигены всевозможных микроорганизмов.

Основные преимущества метода

Данная методика активно используется по всему миру не только потому, что она является очень результативной, но и из-за определенных преимуществ:

• проведение теста не представляет сложности, от пациента требуется лишь сдать кровь;
• для проведения исследования не нужно специальное оборудование;
• исследование не занимает много времени, обычно пациенту оглашают результат в течение 24 часов;
• тест имеет высокую чувствительность и специфичность к сифилису.

Особенности проведения

Для осуществления тестирование требуется венозная кровь. Чтобы расшифровка была достоверной, пациенту необходимо ответственно подойти к подготовке к анализу и строго соблюдать врачебные советы.

Обычно специалисты рекомендуют придерживаться таких правил:

• сдавать биологический материал разрешено только на пустой желудок;
• перед мероприятием (если сдача крови осуществляется днем или вечером) разрешено пить только минеральную воду без газов, употреблять жидкость нужно в небольших объемах;
• за пару часов до сдачи биоматериала запрещено курить;
• категорически запрещено употреблять спиртные напитки за двое суток до процедуры;
• если пациент принимает какие-либо лечебные препараты, об этом непременно нужно предупредить лечащего врача;
• если человек чувствует себя плохо, забор крови лучше перенести на другой день, поскольку это может негативно сказаться на расшифровке результата.

Важнейшим этапом является подбор подходящей клиники. Кровь лучше сдавать в современном диагностическом центре с хорошей репутацией.

Как долго проводится анализ?

Точно сказать, как долго делается расшифровка результатов, невозможно. Скорость ее зависит от самого типа исследования, а также от применяемого оборудования.

Чаще всего РПГА расшифровывается в течение суток, но в некоторых случаях процедура может занять от 2 до 4 дней. Если лаборатория будет сильно загружена, пациенту выдадут бланк с результатами не раньше чем через 5 суток.

Расшифровка результатов

Чтобы выявить наличие патологии, к полученной крови нужно добавить специальную сыворотку. Если в организме человека присутствуют трепонемы, произойдет реакция агглютинации, вследствие чего эритроциты выпадут в осадок.

Число склеенных эритроцитов во многом зависит от того, какое количество антител присутствует в реагенте. Пассивная гемагглютинация показывает не только присутствие антител, но также дает медику возможность определить их количество.

Положительный результат

Если тест показывает положительную реакцию, это свидетельствует о присутствии возбудителя болезни. Чтобы поставить более точный диагноз, пациента нужно направить на дополнительную лабораторную и инструментальную диагностику.

Неотъемлемым этапом обследование является проверка всех членов семьи и людей, с которыми инфицированный человек вступал в половой контакт.

Как показывает медицинская практика, примерно у 5% пациентов в ходе тестирования проявляется ложноположительная реакция, что может произойти при игнорировании подготовительного этапа, а также при:

• формировании онкологических новообразований;
• патологии соединительной ткани;
• наличии гепатита разных форм;
• ВИЧ-инфекции.

Также слабоположительный результат может проявиться при беременности. Ложная “+” реакция практически всегда сопровождается низким титром. Интересным моментом является то, что если человек хотя бы раз болел сифилисом, реакция РПГА всегда будет положительной.

Исключение составляют только те случаи, когда сифилис был выявлен на ранней стадии и после этого сразу началась интенсивная терапия.

Отрицательный результат

Тестирование дает отрицательный ответ в таких случаях:

• у пациента в организме отсутствуют патогенные микроорганизмы, являющиеся возбудителем сифилиса;
• с момента заражения прошло менее 3 недель, и иммунитет еще не начал производить антитела;
• забор крови из вены производился неправильно.

Даже если тестирование показало “-”, специалисты все же рекомендуют пройти дополнительные анализы для подстраховки, чтобы убедиться, что патогенные микроорганизмы отсутствуют.

Точность результата

Многочисленные клинические исследования подтвердили, что такое эта методика дает гарантированно правильный результат, если анализ проводился при соблюдении всех правил и пациент строго придерживался врачебных рекомендаций перед забором крови.

Если тестирование дало положительный ответ, вероятность того, что человек инфицирован сифилисом, составляет более 95%.

Неправильная реакция может проявиться только в тех случаях, если с момента инфицирования прошло слишком мало времени либо лаборант не соблюдал инструкцию при исследовании.

Что касается ложноположительного результата, то он может быть, если диагностика проводилась при наличии инфекционных заболеваний или патологических состояний.

Ложный результат отличается от истинного положительного тем, что он очень быстро становится отрицательным, если тестирование провести повторно через 2 недели.

На данный момент анализ РПГА до сих пор остается самым эффективным и достоверным тестом определения сифилиса и прочих опасных патологий. Поэтому при подозрении на наличие многих заболеваний первым делом медики направляют пациента на РПГА.

Анализ крови РПГА относится к классическим способам диагностики, которые применяются уже многие десятки лет, но по-прежнему актуальны. Для чего в настоящее время проводится РПГА? Почему его иногда предпочитают современным методикам, и когда может столкнуться обычный человек с необходимостью такого исследования?

Наиболее современным методом современной лабораторной диагностики инфекционных заболеваний является полимеразная цепная реакция (ПЦР), которая позволяет определить в любом биологическом материале, от крови и до соскоба со слизистых оболочек остатки генома, или уникального наследственного кода возбудителя болезни. Вторым методом диагностики является определение иммуноглобулинов класса М и G в крови пациента, которые свидетельствуют о развитии специфического иммунного ответа.

Что такое РПГА в анализе крови?

Этот способ исследования (реакция пассивной гемагглютинации, РПГА) имеет и второе название: реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). И в практике может встретиться как аббревиатура РПГА, так и РНГА. Что это за анализ? Для него необходима центрифугированная сыворотка крови пациента, которую совмещают с особым диагностическим реагентом. Классически он называется «эритроцитарный антигенный диагностикум». Для его приготовления долгие годы использовались клетки красной крови, или эритроциты. Но так было сравнительно давно, а в настоящее время биологический материал уже не используют, и вместо этого применяют микроскопические частицы латекса.

На эти частицы с помощью особой технологии наносят характерные для данного инфекционного возбудителя антигены, которые являются его «визитной карточкой». В результате получается множество частиц, на поверхности которых находятся адсорбированные, и крепко связанные с носителем активные молекулы антигена.

В том случае, если в сыворотке крови пациента находятся выработанные к данному возбудителю антитела, то эти частицы латекса или эритроциты, склеиваются антителами между собой, и выпадают в осадок, который называется агглютинацией (переводе означает «склеивание»). Эту реакцию ставят в специальных планшетах, которые выполнены из пластика и рассчитаны на небольшие объемы. А раньше анализ крови на РПГА проводилась с набором обычных пробирок. В них в разных разведениях находилась кровь пациента, к которой и добавляли диагностикум.

В некоторых случаях применяется зеркальный метод, когда диагностикум содержит не антигены, а антитела. Этот метод (РОНГА, или обратная гемагглютинация) применяется при поиске инфекции, при которых в крови циркулируют токсины, например при ботулизме. В таком случае, если у пациента в крови есть ботулотоксин, то он связывается со специфическими антитоксическими антителами диагностикумов, и также наблюдается реакция агглютинации, которую можно определить в зависимости от разведения сыворотки крови.

Расшифровка складывается из самого факта агглютинации, и того максимального разведения сыворотки крови, при которой она еще уверенно определяется. Чем больше разведена кровь, при которой еще есть агглютинация, тем больше в организме пациента находится антител, и тем выше специфическая напряженность иммунитета при классическом проведении этой реакции. Наиболее часто используется разведения от 1:20 до 1:160 и выше. В настоящее время непрямую РНГА чаще всего используют для первичной диагностики сифилиса.

РПГА при сифилисе

Анализ крови РПГА — что это при сифилисе? Это проведение реакции в ее классическом виде, при которой у пациента в сыворотки его крови выявляются циркулирующие антитела к возбудителю сифилиса. Этот способ является недорогим, быстрым, и позволяет первично использовать исследовать биологический материал для скрининга этой инфекции, для обследования доноров, сдающих кровь, для контактных лиц, близко общавшихся с больными.

Таким образом, РПГА при сифилисе является методом первичной неспецифической лабораторной диагностики. Но это вовсе не значит, что если такие антитела выявлены, то это анализ может считаться недостоверным. Выявление антител к бледной спирохете является основой лабораторной диагностики сифилиса и его подтверждения. И реакция пассивной гемагглютинации относятся к специфическим или трепонемный тестам, поскольку в нем используются «настоящие», сифилитические антигены.

После того, как к специфическому диагностикуму добавляется сыворотка крови, больного сифилисом, то происходит гемагглютинация. Эти циркулирующие в крови антитела могут появиться уже через 2 недели после заражения. В этом случае речь идет об антителах «быстрого реагирования», или об иммуноглобулинах класса М. Через месяц они дополняются специфическими иммуноглобулинами класса G. Поэтому при начале заболевания эта реакция определяет только один вид антител, говорящих об острой инфекции, а во вторичном и третичном периоде сифилиса она «улавливает» антитела класса G, которых в крови накапливается довольно много. Именно поэтому чувствительность этой реакции при дебюте заболевания несколько ниже, а если человек болен сифилисом несколько лет, то ее чувствительность приближается к 100% против 86% в случае первичного, свежего и недавнего сифилиса.

Эта реакция является высокоспецифичной и с ее помощью можно подтвердить или опровергнуть первичный диагноз, который был поставлен с помощью применения нетрепонемного теста. К таким нетрепонемным тестам относится RW или всем известная реакция Вассермана. При ее постановке в качестве антигена берется кардиолипиновый антиген, который не имеет никакого отношения к возбудителю. Он очень похож по своей структуре на сифилитический, но, все-таки, несколько отличается от него, и поэтому при этом виде исследования возможны ложноположительные реакции.

РПГА как метод переподтверждения

Поэтому в том случае, если у пациента при реакции Вассермана выявлено положительное ее значение, то для подтверждения или опровержения результатов RW необходимо выполнить реакцию пассивной гемагглютинации. Специфичность РПГА составляет от 96 до 100%. Даже при скрытом сифилисе без всяких проявлений она может также поставить диагноз с практически 100% вероятностью.

Поскольку правила диагностики сифилиса обязательно требуют переподтверждения первичного диагноза другим методом, то в том случае, если первичным методом диагностики является сама РПГА, то ее тоже необходимо переподтвердить, несмотря на ее высокую чувствительность, но уже только с помощью другого метода. И тогда используется тоже трепонемный тест, но только другой, например, нужно расшифровывать новые значения методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Значение при самых ранних сроках и при выздоровлении

Поскольку антитела, принадлежащие к классу иммуноглобулинов G, сохраняются в сыворотке крови, как правило, пожизненно, то даже после активного и успешного лечения сифилиса с последующим выздоровлением эти антитела остаются положительными. Только в том случае, когда сифилис заподозрили и пролечили в «самом зародыше», через несколько дней после заражения, на стадии формирования твердого шанкра и регионарного лимфаденита, то тогда РПГА может быть отрицательной.

Тот факт, что и при вторичном сифилисе, и при третичном РПГА будет одинаково положительной, то это значит, что такое исследование нельзя использовать для дифференциальной диагностики стадий заболевания. С помощью РПГА также невозможно оценить эффективность лечения, поскольку при этом антитела всё равно будут циркулировать в крови. Эффективность терапии необходимо оценивать с помощью других лабораторных анализов. Особенно высокие показатели, то и значительное разведение сыворотки крови пациента при проведении РПГА возникают при вторичном сифилисе, а также при ранней и скрытой форме этой болезни.

О ложноположительных значениях

Но, несмотря на высокую чувствительность и специфичность этого теста, также при проведении РПГА на сифилис возможны ложноположительные значения. Они возникают нечасто, не более чем в 2,6% случаев, и появляются при циркуляции в крови пациента антител, очень похожих на сифилитические, но не являющиеся ими. Это могут быть аутоантитела, и чаще всего такие «сюрпризы» подбрасывает системная красная волчанка.

Также те заболевания, которые вызываются другими представителями трепонем, или спирохет, могут приводить к ложноположительным значениям, например, болезнь Лайма, которую вызывает «близкая родственница» сифилиса Borrelia burgdorferi. О диагностике болезни Лайма, или клещевого боррелиоза, можно прочитать здесь. В некоторых случаях, к таким искажениям приводит онкологическая патология, состояние беременности, и даже вялотекущий острый инфаркт миокарда. В последнем случае в кровь попадают частицы некротизированной сердечной мышцы, которые по своей структуре аналогичны кардиолипиновому антигену, он применяется для постановки реакции Вассермана, и извлекается из сердца крупного рогатого скота.

Также причиной ложноположительных результатов могут быть случаи внутривенной наркомании, ВИЧ-инфекция и вирусные гепатиты B и C, лептоспирозы и возвратный тиф, а также заболевания, которые встречаются в жарких странах и вызываются трепонемами — пинта, фрамбезия, беджель. В редких случаях, у пациентов с низким иммунитетом могут активизироваться трепонемы, которые относятся к сапрофитам и обитают в полости рта. Также туберкулез и инфекционный мононуклеоз могут быть причиной таких реакций, как и в случае обширной политравмы и многочисленных переломов.

Такие ложноположительные реакции необходимо перепроверять через некоторое время, обычно они исчезают в течение полугода, например, после разрешения беременности или в течение более длительного времени.