Как получить сыворотку крови

1. Центрифужные стеклянные пробирки общим объемом 10-12 мл.
2. Стеклянные палочки или Пастеровские пипетки с запаянными на конце капиллярами (для отделения сгустка).
3. Центрифуга лабораторная (до 3000 об/мин).

Венозная кровь, полученная без антикоагулянтов в центрифужную стеклянную пробирку, отстаивается в ней при комнатной температуре (15-200С) в течение 30 минут до полного образования сгустка. По окончании образования сгустка пробирки открывают и осторожно проводят тонкой стеклянной палочкой или запаянным капилляром Пастеровской пипетки по внутренним стенкам пробирки по окружности в верхнем слое крови для отделения столбика сгустка от стенок пробирки. Сыворотку сливают в другую центрифужную пробирку, придерживая сгусток стеклянной палочкой, и центрифугируют, либо центрифугируют в тех же, первичных, пробирках.

После ретракции сгустка пробы центрифугируют при относительной центробежной силе RCF от 1000 до 1200 xg (максимально до 1500 xg) в течение 10 минут.

В случае использования микропробирок и центрифуги для них центрифугирование проводят при 6000-15000 xg в течение 1,5 минут. После центрифугирования сыворотку сливают во вторичные (транспортные) пробирки. Сыворотка не должна быть гемолизированной.

Плазма получается из крови путем отделения клеток крови. Она представляет собой бесклеточную надосадочную жидкость, которая получается при центрифугировании крови, свертываемость которой ингибирована добавлением антикоагулянтов тотчас после взятия. В плазме содержатся факторы свертывания крови. В связи с тем, что плазма и сыворотка содержат около 93% воды, в отличие от цельной крови, которая содержит около 81% воды, концентрация компонентов в плазме на 12% выше, чем в цельной крови. Это может иметь принципиальное диагностическое значение при исследовании активности, например, ЛДГ у которого наиболее высокая концентрация наблюдается в сыворотке крови, чем в плазме.

Широко применяются коммерческие системы для получения плазмы. Они представляют собой пробирки или устройства типа шприцев (“вакутейнер”) с вакуумом внутри, содержащие различные антикоагулянты и/или ингибиторы гликолиза. Как и в случае устройств для сыворотки, эти пробирки для плазмы имеют разные варианты, содержащие разделительные гели и гранулят из полистирола, ускоряющие получение плазмы, облегчающие транспортировку и хранение. В них уже имеются антикоагулянты и метки до которых следует набирать кровь.

Методика получения плазмы

Венозную кровь, полученную с антикоагулянтом немедленно после взятия перемешивают переворачиванием пробирок с кровью, закрытых крышками, не менее 5 раз. Перемешивание должно осуществляться без встряхивания и пенообразования. Время между началом наложения жгута и смешиванием крови с антикоагулянтом не должно превышать 2 минут.

После уравновешивания пробирок с кровью, их центрифугируют при RCF 1000-1200 xg, но не более 1500 xg, в течение 10-15 минут. Плазму немедленно сливают в транспортную центрифужную или химическую пробирку. Пробирку закрывают крышкой.

Условия транспортировки плазмы крови

Правильно полученная и собранная плазма крови должна быть своевременно доставлена в лабораторию. При комнатной температуре время доставки не должно превышать 24 часа. Если доставка плазмы в лабораторию осуществляется в течение дня, то она хранится при температуре +4. +80С (в холодильнике) и далее в специальных транспортных контейнерах в ледяной бане доставляется в лабораторию. Для более длительного хранения плазма может быть заморожена при температуре –200 С

Как получают плазму крови?

Путем осаждения форменных элементов

Как получают сыворотку крови?

Путем введения коагулянтов в плазму крови

В чем состоит различие между плазмой и сывороткой крови?

Сыворотка отличается от плазмы отсутствием в ней белка фибриногена, перешедшего в сгусток крови.

Что такое термин ацидоз?

Ацидоз – нарушение кислотно-основного состояния, при котором в крови появляется относительный или абсолютный избыток кислот. (уменьшению рН)

Что такое термин алкалоз?

АЛКАЛОЗ – одна из форм нарушения кислотно-щелочного (кислотно-основного) равновесия в организме, характеризующаяся сдвигом соотношения между анионами кислот и катионами оснований в сторону увеличения катионов.

Какое значение рН при закислении крови не совместимо с жизнью?

ниже 6,8 и выше 7,8

Какое значение рН при защелачивании крови не совместимо с жизнью?

рН ниже 6,8 и выше 8,0,не совместимы сжизнью

Какими методами можно разделить белки сыворотки крови?

Разделение белков сыворотки крови методом электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы

Принцип метода: Белки являются амфотерными электролитами. Направление движения белков в электрическом поле зависит от рН среды. Коллоидные частицы белка перемещаются в электрическом поле постоянного тока к аноду – в щелочной среде, к катоду – в кислой среде.

Разделение белков сыворотки обычно проводят в буферном растворе при рН 8,6 – 8,9. В качестве носителя используют пленки из ацетата целлюлозы. В этих условиях заряженные белки сыворотки крови перемещаются по смоченным пленкам из ацетата целлюлозы в направлении анода со скоростью, зависящей от величины заряда и относительной молекулярной массы белка. Этот след представляет собой дорожку, на которой после окрашивания ясно видны места концентрации белков различных фракций. Наиболее быстро движутся альбумины, затем a₁-, a₂-, b-глобулины, и, наконец, g-глобулины. По этим следам (дорожкам) можно определить содержание белка в различных белковых фракциях пробы. Методом электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы можно получить 5 и более белковых фракций.

Что происходит при гемолизе?

разрыв оболочки эритроцитов и выход гемоглобина в плазму крови

Почему для биохимического анализа нельзя использовать гемолизированную кровь?

гемолизированная сыворотка и плазма не пригодна для определения ЛДГ, Железа, АСТ, АЛТ, калия, магния, креатинина, билирубина и др.

Почему биохимическое исследование крови проводят натощак?

Для точного определения работы органов без нагрузки. Липопротеиды подразделяют на несколько классов в зависимости от их плотности (которую оценивают путем ультрацентрифугирования) и подвижности при электрофорезе. Плотность липопротеидной частицы определяется отношением апопротеины/липиды: чем больше это отношение, тем выше плотность. Подвижность при электрофорезе зависит от содержания апопротеинов и полярных липидов. В крови, взятой натощак, присутствуют только ЛПОНП, ЛПНП иЛПВП, тогда как другие липопротеиды (хиломикроны, остаточные компоненты хиломикронов, а также ЛППП) выявляются только после еды или при нарушениях обмена липидов.

С какой белковой фракцией плазмы крови перемещаются при электрофорезе ЛПВП?

С какой белковой фракцией плазмы крови перемещаются при электрофорезе ЛПНП?

При какой патологии в плазме крови снижается количество ЛПВП?

О чем свидетельствует понижение содержания холестерола ЛВП в плазме крови.

Норма не менее 0,9 ммоль/л в противном случае-риск развития ишемической болезни сердца. Желательно ХС ЛВП =выше 1,54 ммоль/л.

ЛВП собирают избыток ХС из клеточных мембран ( в первую очередь сосудистой стенки) и переносят его в печень, где он идет на образование желчных кислот. Повышается риск развития атеросклероза .

Как получают плазму крови?

Путем осаждения форменных элементов

Как получают сыворотку крови?

Путем введения коагулянтов в плазму крови

Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; Нарушение авторского права страницы

Прежде чем выяснить, что такое сыворотка, нужно вспомнить, из чего состоит кровь. Как известно, в ее состав входит плазма и находящиеся в ней в виде взвеси форменные элементы, большая часть которых – эритроциты (красные тельца). Плазма – мутноватая желтоватая жидкость, состоящая преимущественно из воды и лишь на 10% из сухого остатка. Около 8% сухого остатка – это белковые компоненты, представленные альбуминами (около 4,5%), семейством глобулинов (до 3,5%), фибриногеном (0,2-0,4%).

Фибриноген – растворимый бесцветный белок, основной фактор свертывания крови. При активации системы свертывания под воздействием тромбина превращается в нерастворимый фибрин, имеющий вид нитей и составляющий основу тромба.

Состав

В сыворотке крови находится большое количество разных веществ, среди которых:

• Креатинин, необходимый при энергетических процессах. По его уровню диагностируют патологии почек.
• Калий, кальций, магний, железо, натрий, фосфор и т.д.
• Ферменты.
• Холестерин низкой и высокой плотности.
• Питательные вещества (липиды, глюкоза).
• Витамины.
• Гормоны: пролактин, кортикотропин, адреналин, кортизол, инсулин, дофамин, прогестерон, тестостерон и другие.

Как выделяют

Сыворотку крови можно получить двумя способами:

1. В результате естественного свертывания крови вне человеческого организма, во время которого происходит образование тромба и отделение жидкой составляющей. Сначала кровь 30 минут отстаивается, затем из нее удаляют сгусток крови, а жидкую часть помещают на десять минут в центрифугу.
2. Путем воздействия на фибриноген ионами кальция. Этот процесс освобождения плазмы от фибриногена называется дефибринированием.

Для чего нужна

Сыворотку из плазмы выделяют в следующих случаях:

• для биохимического анализа крови;
• с целью выявления в организме возбудителя инфекции;
• для оценки эффективности вакцины;
• для изготовления сывороточного препарата индивидуального назначения.

Сыворотка отличается стабильностью, при этом в ней сохраняется большая часть антител.

Специальные меченые сыворотки (ферментами, радионуклидами, люминофорами) используют в диагностических целях и в научно-исследовательской деятельности).

Сыворотка крови считается самым распространенным реактивом при проведении биохимии крови, которая позволяет оценить эффективность обменных процессов в организме и работу его систем.

Выделяют два типа сывороточных реакций:

• прямые (двухкомпонентые): осаждения, склеивания и выпадения в осадок и другие;
• косвенные (трехкомпонентные): микробной нейтрализации, торможения склеивания эритроцитов и другие.

Для чего делают анализ сыворотки

Этот анализ необходим для определения уровня гормонов, белков иммуноглобулинов, иммунных комплексов, ферментов, а также таких минералов, как железо, кальций, калий, магний и других. Выявление неспецифических ферментов, которых в крови быть не должно, помогает диагностировать целый ряд патологий следующих органов:

• поджелудочной железы;
• скелетных мышц;
• предстательной железы;
• костной ткани;
• желчевыводящих путей;
• печени.

Во время лабораторного исследования в первую очередь изучают белковый состав сыворотки: общий уровень альбуминов и глобулинов и их соотношение

Повышенное содержание протеинов может свидетельствовать о нарушении свертываемости крови, недавней вакцинации, обезвоживании, злокачественных опухолях. Если белков мало, это признак соблюдения безбелковой диеты, голодания, нарушения процесса производства белков, болезней почек и печени, эндокринных патологий, кровотечений, рака.

Кроме этого, определяют содержание конкретных видов белков. Например, по уровню сложного белка ферритина, отвечающего за хранение и транспортировку железа, определяют, сколько последнего содержится в организме.

По количеству в сыворотке неоптерина – метаболита нуклеиновых оснований – определяют, есть ли иммунный ответ и насколько быстро он появляется при инфекциях, опухолях и других поражениях.

Отличие от плазмы крови

Считать, что плазма крови и сыворотка – одно и то же, неверно. Кратко сформулировать основные различия можно следующим образом:

• плазма – это цельный компонент крови, сыворотка – часть плазмы;
• в плазме находится нерастворимый белок фибриноген, сыворотка его лишена;
• плазма всегда имеет желтоватый оттенок, сыворотка может быть красноватой;
• плазма свертывается, если в ней есть коагулаза – фермент, выделяемый некоторыми болезнетворными микробами, а сыворотка – нет.

Иммунные сыворотки

Их основой является иммуноглобулин Ig. Другие названия – антисыворотки и иммунобиопрепараты. Применяются для предупреждения и лечения инфекций. Их действие заключается в том, что находящиеся в их составе антитела вступают в реакцию с ядами или возбудителями болезней, в итоге происходит образование иммунных комплексов, которые затем удаляются с помощью фагоцитов и путем активации системы комплемента (комплекса сложных белков, находящихся в крови). Они позволяют сформировать у человека пассивный иммунитет и тем самым нейтрализуют болезнетворных микроорганизмов и токсины.

Антисыворотки делятся на два вида:

• Гомологичная . Её получают из крови человека. Обычно используется плазма доноров, прошедших вакцинацию; кровь людей, переболевших определенными инфекционными болезнями; плацентарная и абортивная кровь.
• Гетерогенная . Такие сыворотки делают из крови животных.

Порядок получения антисыворотки

1. Проведение курса гипериммунизации человека или животного. Через определенные промежутки времени вводятся нарастающие дозы антигенов.
2. Получение сыворотки путем естественного свертывания крови.
3. Щадящее очищение (методом антигенного извлечения или методом ферментолиза).
4. Выделение и концентрация иммуноглобулинов. Гетерогенную сыворотку получают путем спиртового фракцирования.

Самая эффективная получается при использовании метода антигенного извлечения после ферментолиза иммуноглобулинов. Такая сыворотка содержит до 95 % антитоксинов и дает лучшие результаты при использовании. Считается, что она в несколько раз эффективнее очищенных другими способами.

Применение

Иммунные сыворотки сегодня широко применяются в целях профилактики и терапии инфекционных поражений: гриппа, дифтерии, столбняка, кори и других. При диагностике они позволяют определить вид, подвид, серотип возбудителя болезни, что помогает точно поставить диагноз и выбрать метод терапии.

Для обезвреживания яда змей, скорпионов, токсинов ботулизма существуют специальные сыворотки. После укуса собаки человеку назначают сыворотку в целях предупреждения бешенства.

Чем отличается от вакцины

Главное ее отличие от вакцины заключается в том, что она действует намного быстрее и уже через несколько часов у человека наблюдается улучшение. Это важно в случае, если заболевание имеет быстрое развитие. Но действуют они недолго: гомологическая – до пяти недель, гетерогенная – до трех недель, в то время как вакцина имеет более длительный срок действия.

Сыворотки профилактические

Лечебно-профилактические сыворотки, в зависимости от применения, делят на три вида:

• Противовирусные (грипп, корь).
• Противобактериальные (чума, тиф, дизентерия).
• Антитоксические (ботулизм, гангрена, столбняк).

Заключение

Сыворотка крови, как материал для исследования, имеет преимущество перед плазмой, поскольку лишена главного фактора свертывания крови и обладает стабильностью. Кроме этого, на основе сыворотки готовят эффективные средства для предотвращения и лечения инфекций.