Анализ жак 2 что это

Анализ на JAK2-мутацию — это лабораторное исследование, которое проводят при миелопролиферативных заболеваниях крови: хроническом миелолейкозе, истинной полицитемии, эссенциальной тромбоцитемии и идиопатическом миелофиброзе.

Cинонимы: JAK2 mutation, Janus kinase 2 mutation.

JAK2-мутация — это

соматическая мутация в положении 1849 G>T гена JAK2 (Янусовой киназы) приводит к изменениям в стволовой кроветворной клетке и нарушению процесса образования клеток крови.

JAK2-мутация положительна при следующих заболеваниях:

• истинная полицитемия 99%
• эссенциальная тромбоцитемия 55%
• идиопатический миелофиброз 65%
• хронический миелолейкоз
• миелодиспластический синдром с кольцевидными сидеробластами

Анализ на JAK2 мутацию применяется для диагностики миелопролиферативных заболеваний, исключения вторичных причин повышенного уровня тромбоцитов (вторичной тромбоцитемии) и эритроцитов (вторичного эритроцитоза).

Что такое JAK2?

Ген JAK2 расположен на 9-й хромосоме (в положении 9p24) и кодирует протеиновую тирозинкиназу JAK2, которая, в свою очередь входит в группу янусовых протеинкиназ (JAK1, LAK2, JAK3, JAK4).

JAK2 представлена во всех клетках тела, в том числе и клетках крови, где принимает участие в передаче сигнала активируя транскрипцию во многих клеточных процессах.

Мутация JAK2 приводит к дерегуляции JAK-STAT и последующему аномальному накоплению онкопротеинов с фенотипическими чертами миелопролиферативных неоплазий.

Миелопролиферативные заболевания

Миелопролиферативные заболевания — группа заболеваний костного мозга, объединенных в вместе по признаку первичной мутации на уровне стволовой клетки крови. Характеризуется не контролируемым делением и созреванием одной или нескольких клеточных линий крови (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты) и постепенным угнетением нормального кроветворения.

Слово «миелопролиферативный» значит, что костный мозг (на греческом миелос) пролиферирует, вырабатывает в избыточном количестве клетки крови. Нарушение возникает на уровне плюрипотентной стволовой клетки (плюрипотентный — значит может развиваться в любую сторону — как в лейкоциты, так и эритроциты или тромбоциты).

Например, при истинной полицитемии увеличивается число прежде всего эритроцитов, при тромбоцитемии — тромбоцитов, первичном миелофиброзе — также тромбоцитов, а при хроническом миелолейкозе — лейкоцитов (гранулоцитов).

Частота миеопролиферативных заболеваний довольно большая, ежегодно заболевают 6-9 человека из 100 тысяч. Чаще болеют люди старшего возраста, после 50-ти лет.

Симптомы миелопролиферативных заболеваний крови

• общая слабость
• снижение веса и отсутствие аппетита
• повышенная потливость, особенно в ночные часы
• тяжесть в правом/левом подреберье

Исследование JAK2-мутации проводят

• повышенное/сниженное число тромбоцитов в крови
• анемия — снижение уровня гемоглобина и/или эритроцитов в крови неясного происхождения
• повышенное число эритроцитов в крови
• повышенное/сниженное количество лейкоцитов в крови

Методы исследования JAK2-мутации

• аллель-специфическая полимеразная цепная реакция (ПЦР) (AS-PCR)
• прямое секвенирование продуктов ПЦР
• ПЦР в реальном времени (real-time PCR)

Аналитическая чувствительность и специфичность секвенирования 99%.

Материал для анализа на JAK2-мутацию

• венозная кровь, взятая в пробирку с ЭДТА
• фиксированная ткань костного мозга, полученная при трепанобиопсии или стернальной пункции

Норма

• JAK2-мутация не обнаружена

Исследование JAK2-мутации проводят вместе со следующими исследованиями

• общий анализ крови — эритроциты, эритроцитарные индексы, гемоглобин, гематокрит, лейкоциты и лейкоцитарная формула, тромбоциты
• микроскопия мазка крови
• витамин В12, фолиевая кислота
• эритропоэтин
• биохимический анализ крови
• СОЭ — скорость оседания эритроцитов
• электрофорез белков крови
• онкомаркеры
• BCR/ABL мутация
• CALR-мутация
• MPL-мутация
• стернальная пункция
• трепанобиопсия

Факторы, влияющие на результат анализа

• не обнаружены

Расшифровка результата анализа

• JAK2-мутация выявлена
• JAK2-мутация не выявлена

Отрицательный результат исследования на JAK2-мутацию не исключает диагноз миелопролиферативного заболевания, но делает его менее вероятным.

Полиморфизм Val617Phe

Физиология и генетика. JAK – тирозин-киназы, фосфорилирующие STAT-факторы (Janus kinase, названы так благодаря присутствию в одной молекуле двух киназных доменов) ассоциированы с рецепторами цитокинов, но неактивны пока рецепторы не агрегируют под действием цитокинов (аналогично рецепторам факторов роста). После агрегации происходит активация Jak за счет их трансфосфорилирования. Активированные Jak фосфорилируют множество тирозинов в цитоплазматической части рецепторов. К этим фосфотирозинам присоединяются молекулы белков, известных под общим названием белки STAT (signal transducers and activators of transcription). Белки STAT димеризуются и проникают в ядро. Там они сами или с участием других белковых факторов индуцируют транскрипцию тех или иных генов.

Миелопролиферативные заболевания (МПЗ) – заболевания, характеризующиеся избыточной пролиферацией (выработкой клеток) одного или нескольких ростков кроветворения. Нарушения возникают на уровне стволовых клеток, вследствие чего может развиваться эритремия, сублейкемический миелоз, тромбоцитемия и хронический миелолейкоз.

Показания к анализу
• Установка или подтверждение диагноза истинной полицитемии, эссенциальной тромбоцитемии или идиопатического миелофиброза.
• Дифференциальная диагностика истинной полицитемии и вторичного эритроцитоза.
• Дифференциальная диагностика эссенциальной тромбоцитемии и реактивного тромбоцитоза.
• Определение риска развития тромбозов.
• Определение риска прерывания беременности.
• Дополнительная дифференциальная диагностика идиопатического миелофиброза и атипичных форм МПЗ.
• Дополнение к цитогенетическому и гистологическому исследованию костного мозга.

Клинические данные. Недавние исследования обнаружили связь мутации V617F в гене JAK2 с классическими bcr/abl-негативными МПЗ: истинной полицитемией (болезнь Вакеза), эссенциальной тромбоцитемией (ЭТ) и идиопатическим миелофиброзом (ИМ). Кроме того, данная мутация в редких случаях встречается при атипичных МПЗ и миелодиспластических синдромах.

Соматическая мутация V617F приводит к усилению сигнала от JAK2, ведущую к избыточной пролиферации того или иного ростка клеток. В исследовании E Joanna Baxter et al. [15781101] было продемонстрировано, что мутация V617F встречается в 97% при истинной полицитемии, в 57% при эссенциальной тромбоцитемии и в 50% при идиопатическом миелофиброзе.
Полученные результаты согласуются с исследованиями, проведенными другими группами авторов: 65-97% при истинной полицитемии, 23-57% при эссенциальной тромбоцитемии и 35-95% при идиопатическом миелофиброзе.

Peter J Campbell et al. [16325696] проанализировал взаимосвязь полиморфизма V617F с различными показателями крови у пациентов с эссенциальной тромбоцитемией. В работе приняли участие 806 пациентов. Авторы отметили увеличение уровня гемоглобина (в среднем на 9.6 г/л; 95% CI, 7.6–11.6 г/л; Р=0.0001) и нейтрофилов (на 1.1×109/л; 95% CI, 0.7–1.5х109/л; Р=0.0001), а также уменьшение сывороточного эритропоэтина (на 13.8 Ед/л; 95% CI, 10.8–16.9 Ед/л; Р=0.0001) и ферритина (n=182; 58 против 91 г/л; Р=0.01) у пациентов с изучаемым полиморфизмом.

Миелопролиферативные заболевания способствуют развитию венозных тромбозов. Так, Colaizzo D. et al. [17059429] проанализировали истории болезни 99 пациентов с тромбозами воротной (портальной) вены (ТВВ) и тромбозами мезентериальных сосудов. Мутация гена JAK2 V617F обнаружилась у 17 человек (17,2%). Ни у одного из этих пациентов не выявлялись врожденные факторы риска к тромбофилии. 7 из 17 больных с мутацией JAK2 V617F (43,8%) и еще 2 человека (2,4%) без мутации JAK2 V617F на момент первого эпизода венозного тромбоза имели диагноз МПЗ. За период наблюдения, который составил в среднем 41 месяц, еще у 3 пациентов с мутацией JAK2 V617F обнаружились миелопролиферативные процессы. Ученые пришли к выводу, что изучаемый полиморфизм является маркером венозных тромбозов, а также необходим для более тщательного обследования пациентов на предмет развития миелопролиферативных заболеваний.

Интересное наблюдение представили Stefano et al. [17263783] Они определяли мутацию в гене JAK2 V617F у 139 взрослых больных (старше 18 лет) с или без хронического МПЗ с тромбозами печеночных вен (15 человек), внепеченочных ТВВ и/или мезентериальных вен (79 человек) и церебральных вен (45 человек). Только 19 пациентов полностью соответствовали критериям истинной полицитемии (8 человек) или эссенциальной тромбоцитемии (11 человек) на момент возникновения тромбоза: у 4 больных развился тромбоз печеночных вен, у 11 – ТВВ и/или тромбоз мезентериальных вен, у 4 больных – тромбоз церебральных вен. Мутация в гене JAK2 V617F обнаруживалась у 94,7% больных с хроническим МПЗ, у 21,5% больных с тромбозами абдоминальных сосудов без МПЗ и у 4,8% больных с тромбозами церебральных вен без МПЗ. Среди пациентов без МПЗ и без тромбофилий, но с неспровоцированным тромбозом, 29,4% имели тромбоз вен внутренних органов, 42,8% имели ТВВ – одновременно с присутствием мутации гена JAK2 V617F. Таким образом, даже при отсутствии признаков явного МПЗ значительная часть больных с ТВВ и тромбозами сосудов головного мозга несет мутацию JAK2 V617F и имеет высокий риск повторных тромбозов.

Mercier et al. (2007) [17989398] исследовали наличие мутации V617F гена JAK2 у 3496 женщин в связи с риском невынашиваемости беременности. Исследователи обнаружили, что соматическая мутация в значительной степени ассоциирована с потерей плода «fetal loss» (OR=4.63; Р = 0.002) и потерей эмбриона «embryonic loss» (OR=7.20; Р = 0.009). Авторы отмечают, что риск выкидыша у исследованных женщин при наличии мутации увеличивался независимо от генотипов 1691A фактора Ляйдена и 20210A протромбина.

Важное замечание: мутация V617F является соматической, т. е:
1. Возникает у человека спонтанно, а не передается по наследству от родителей.
2. Мутантный аллель выявляется в основном в виде гетерозиготного генотипа.
3. Возможно возникновение мутации через несколько лет после проведения данного анализа, следовательно, при необходимости целесообразно повторное проведение анализа.

Миелопролиферативные заболевания крови – Янус киназа 2 (JAK 2)

Определение мутации гена, контролирующего кроветворение (JAK 2), представляет собой генетический метод исследования. Анализ назначается для выявления риска развития тромбозов и формирования миелопролиферативных заболеваний. В результате изучения генома обнаруживают мутационные изменения, устанавливают повышенную активность свертывающей способности крови вследствие нарушения физиологической активности янус киназы 2. Основываясь на результатах обследования, проводят профилактические мероприятия, предупреждающие развитие патологии.

Показания для проведения анализа

Миелопролиферативные заболевания представляют собой патологический процесс, связанный с повышенной активностью того или иного ростка кроветворения. Изменения возникают на уровне стволовых клеток, вследствие чего развиваются такие болезни, как хронический миелолейкоз, сублейкемический миелоз, тромбоцитемия, эритремия, истинная полицитемия (болезнь Вакеза). Мутации гена, кодирующего янус киназу 2, приводят к усилению функциональной активности вещества и присоединению к нему молекул STAT-белков. Это вызывает повышение индукции транскрипции генов, расщеплению ядра, усиленному делению предшественников клеток крови.

Обследование назначается в следующих случаях:

• выявление атипичных форм миелопролиферативных заболеваний;
• подтверждение диагноза эссенциальной тромбоцитопении, истинной полицитемии, идиопатического миелофиброза;
• дифференциальная диагностика первичного и вторичного эритроцитоза;
• дополнительный метод исследования при цитологии и гистологии костного мозга;
• определение риска появления тромбозов и тромбоэмболических осложнений.

Все миелопролиферативные заболевания обуславливают высокую вероятность развития тромбозов венечных аретрий, мезентериальных сосудов, вен головного мозга.

Подготовка к проведению анализа

Лабораторное обследование проводят путем ПЦР с использованием рестрикционной методики. Она заключается в обработке генетического материала ферментативными препаратами, содержащими рестриктазы. Эти вещества способны разрывать фосфатные связи в определенных аллелях ДНК, что позволяет определять изменения в результате мутаций. Полученные данные сравнивают с рестрикционными картами нормальной очередности нуклеотидов.

Для анализа делают забор крови из локтевых вен утром натощак или после 10 часового воздержания от пищи. Перед обследованием необходимо избегать стрессовых нагрузок, также следует отказаться от курения и употребления алкоголя. Генетическое исследование не требует отмены лекарственных препаратов.

Выявление мутации гена янус киназы 2 (JAK 2), кодирующего процессы кроветворения, указывает на риск появления инфаркта миокарда, тромбозов и миелопролиферативных заболеваний. Это позволяет назначить лечебно-профилактические меры на доклиническом этапе патологического процесса.